加味丹參飲預(yù)處理通過調(diào)控JAK2-STAT3通路對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:
　　研究JAK2/STAT3通路在缺血預(yù)處理中對大鼠心肌細(xì)胞再灌注損傷的調(diào)控作用，從信號轉(zhuǎn)導(dǎo)水平探討加味丹參飲對梗死大鼠心肌的保護(hù)機(jī)制。
　　方法:
　　1.健康Wister大鼠90只,每只250-300g，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，將90只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字法分為NC組（正常組）、I/R組（缺血再灌注組）、IPC組（缺血預(yù)處理組）、JDD組（加味丹參飲預(yù)處理組）、IPC+RPM組（缺血預(yù)處理組+STAT抑制劑雷帕霉素組

2、）、JDD+RPM組（加味丹參飲+雷帕霉素組）、IPC+AG490組（缺血預(yù)處理組+JAK抑制劑α-氰基-(3，4-羥基)N-芐苯乙烯胺組）、JDD+AG490組（加味丹參飲+JAK抑制劑α-氰基-(3，4-羥基)N-芐苯乙烯胺組）、JDD+10058-F4組（加味丹參飲預(yù)處理+c-myc抑制劑10058-F4組）。制作心肌缺血再灌注模型，實(shí)時監(jiān)測心電圖，心電圖ST段向上抬高為結(jié)扎成功。結(jié)束后1.取各組大鼠各三只以Evans-bule，

3、TTC雙染色法染色心肌，測定心肌梗死面積，梗塞面積以壞死心肌重量與缺血區(qū)心肌重量之比表示。再取各組大鼠各三只石蠟包埋，石蠟包埋，切片，二甲苯脫蠟，常規(guī)HE染色，樹脂封片。在光鏡下以HP10x40行細(xì)胞心態(tài)學(xué)觀察。
　　2.取各組大鼠各三只Western blot測定各組心肌細(xì)胞JAK2、STAT3蛋白的表達(dá)。
　　3.PCR測定各組大鼠心肌細(xì)胞c-myc基因表達(dá)。最后應(yīng)用SPSS17.0 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件將實(shí)驗(yàn)

4、結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。多組比較采用單因素方差分析,p<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.以心電圖出現(xiàn)弓背樣抬高為結(jié)扎成功。結(jié)扎冠脈不同的時間后可造成心肌細(xì)胞不同程度的缺血損害。I/R組ST段向上抬高約0.75(心電圖背景的一豎格記為1)。加味丹參飲預(yù)處理組與IPC組反復(fù)4次的5 min結(jié)扎，10 min再灌注的預(yù)處理后，再缺血結(jié)扎時，ST抬高為0.50，下降了約33.3％(p<0.05)。
　　2.IPC組

5、比I/R組梗死面積減少11%；JDD組與IPC組相比，梗死面積減少3%(p<0.05)。IPC+AG490組與IPC組相比，梗死面積增加5%(p<0.05)。
　　3.病理結(jié)果:I/R組的心肌纖維變長，排列紊亂和斷裂，肌纖維間距增寬，肌節(jié)縮短，排列不規(guī)整,間質(zhì)水腫、充血或出血，有炎癥細(xì)胞浸潤。IPC組與加味丹參飲預(yù)處理組雖有心肌的損傷但是心肌肌原纖維排列較規(guī)整，肌節(jié)排列亦較為整齊，偶見炎性細(xì)胞與紅細(xì)胞浸潤，病變較I/R輕。

6、　　4.I/R組的蛋白表達(dá)低于其他8組，有顯著差異(p<0.05)。JDD組、IPC組JAK2、STAT3表達(dá)與I/R組比較，有明顯的差異(p<0.05)。IPC+AG490組，IPC+RPM組,IPC+10058-F4組的STAT3蛋白表達(dá)明顯低于IPC組，有顯著性差異(p<0.05)。同時IPC+RPM組蛋白表達(dá)高于IPC+AG490組，有顯著性差異(p<0.05)。JDD組、IPC組與I/R組比較，有明顯的差異(p<0.05)，I

7、PC組與JDD組比較結(jié)果無差異(p>0.05)。
　　5.I/R組中myc低表達(dá)，IPC組中myc高表達(dá)，有顯著差異(p<0.05)。JDD組myc基因表達(dá)量高于I/R組，有非常顯著性差異（p＜0.01）。而IPC+RPM組、IPC+AG490組抑制了JAK2、STAT3后myc基因呈低表達(dá)，有顯著性差異（p<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.在心肌梗死再灌注后存在缺血再灌注損傷，其產(chǎn)生機(jī)制與JAK/STAT信號通路有