肢體缺血后處理通過JAK2-STAT3對大鼠缺血再灌注損傷的作用機(jī)制.pdf

1、目的:觀察肢體缺血后處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，研究內(nèi)源性蛋白酪氨酸激酶2(Janus kinase2，JAK2)/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肢體缺血后處理對腦保護(hù)作用中的機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法:用改良線栓法制備局灶性大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型(Middle cerebral arte

2、ry occlusion and reperfusion，MCAO/R)。60只健康雄性SD大鼠（240-260g）隨機(jī)平均分為4組，假手術(shù)組（sham）、缺血再灌注組（I/R組）、肢體缺血后處理(Lpost組)、肢體缺血后處理+AG490(JAK2/STAT3通路阻斷劑)組（Lpost+AG490組）。I/R組:缺血2小時，再灌注24小時。Lpost組:缺血2小時，再灌注24小時，再灌注前實(shí)施肢體缺血后處理（缺血15min，灌注15m

3、in）3個循環(huán)。Lpost+AG490組:再灌注前5min時腹腔注射AG490lmg/kg，其他處理與Lpost組相同。分別采用神經(jīng)功能評分法觀察大鼠行為學(xué)評分變化，HE染色病理形態(tài)學(xué)觀察大鼠腦組織損傷情況的變化，TTC染色測腦梗死體積，TUNEL法測定腦細(xì)胞凋亡，western blot法檢測大鼠缺血半暗帶區(qū)P-STAT3表達(dá)，免疫組織化學(xué)法測Caspase-3免疫陽性細(xì)胞數(shù)。分析肢體缺血后處理與腦缺血再灌注損傷及P-STAT3、Ca

4、spase-3免疫陽性細(xì)胞數(shù)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:1.肢體缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)行為學(xué)變化的影響:假手術(shù)組大鼠無明顯神經(jīng)功能缺損，腦缺血再灌注模型組、肢體缺血后處理組及肢體缺血后處理+AG490組均有不同程度的神經(jīng)功能缺損，神經(jīng)行為學(xué)評分差異有顯著意義(P＜0.01)，提示肢體缺血后處理能改善神經(jīng)功能缺損癥狀。2.肢體缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷后缺血側(cè)頂葉皮層（尾狀核平面）病理改變的影響:假手術(shù)組大鼠腦組織

5、結(jié)構(gòu)正常，內(nèi)皮細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，胞漿及胞核清晰。缺血再灌注組可見大腦皮層細(xì)胞體積縮小，胞漿疏松，胞質(zhì)濃縮，核固縮，染色質(zhì)濃集于核膜附近，形成凋亡小體。肢體缺血后處理+AG490組神經(jīng)細(xì)胞變性壞死程度較缺血再灌注組輕，而肢體缺血后處理組較前兩者則壞死程度更輕，其差異有顯著意義(P＜0.05)，提示肢體缺血后處理可以減少腦神經(jīng)病理組織損傷。3.肢體缺血后處理對大鼠腦梗死病灶體積的影響:缺血主要累及皮層和基底節(jié)，TTC染色未缺血部分呈紅

6、色，缺血部分呈淡白色。假手術(shù)組大鼠腦組織無梗死病灶。缺血再灌注組腦梗死面積最大，肢體缺血后處理+AG490組腦梗死面積較前者減少，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，肢體缺血后處理組梗死面積最小，肢體缺血后處理組與缺血再灌注組及肢體缺血后處理+AG490組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示肢體缺血后處理可以減少腦梗死病灶體積。4.肢體缺血后處理對Caspase-3免疫陽性細(xì)胞數(shù)的影響:Caspase-3主要表達(dá)于神經(jīng)元，免

7、疫陽性細(xì)胞呈棕黃色，鏡下見胞質(zhì)、胞核棕黃色著色或顆粒沉著為陽性細(xì)胞，未見棕黃色染色為陰性結(jié)果。假手術(shù)組僅有少量Caspase-3陽性細(xì)胞表達(dá)，可能為正常凋亡細(xì)胞。I/R組Caspase-3免疫陽性細(xì)胞數(shù)最多，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與I/R組比較，Lpost組、Lpost+AG490組Caspase-3免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。且Lpost組較Lpost+AG490組Caspas

8、e-3免疫陽性細(xì)胞數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示肢體缺血后處理可以減少Caspase-3免疫陽性細(xì)胞數(shù)。5.肢體缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷后缺血側(cè)頂葉腦組織中P-STAT3表達(dá)的影響:假手術(shù)組未見明顯P-STAT3蛋白的表達(dá)，缺血再灌注組組腦組織P-STAT3蛋白的表達(dá)明顯增多，肢體缺血后處理組P-STAT3蛋白的表達(dá)減少，肢體缺血后處理+AG490組P-STAT3蛋白的表達(dá)明顯減少。肢體缺血后處理組與缺血再灌注組

9、及肢體缺血后處理+AG490組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示肢體缺血后處理可以減少P-STAT3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論:1.腦缺血再灌注后出現(xiàn)大鼠神經(jīng)功能缺損、腦組織病理損傷明顯，腦梗死體積增加，腦細(xì)胞凋亡數(shù)目增多。2.大鼠腦缺血再灌注增加P-STAT3表達(dá)、Caspase-3陽性細(xì)胞表達(dá)。Caspase-3參與缺血區(qū)細(xì)胞凋亡的形成，而STAT3激活及超量表達(dá)可能調(diào)節(jié)缺血后Caspase-3表達(dá)。3.肢體缺血后處理能改