過表達Tcfec對造血干細胞的影響研究.pdf

1、在血液系統(tǒng)中，轉錄因子Tcfec主要在造血干細胞(Hematopoieticstemcells，HSCs)和多能祖細胞(Multipotentprogenitors,MPPs)中高表達。目前為止，關于Tcfec在HSCs的功能影響及機制尚不清楚。
　　目的：
　　1、證實Tcfec在HSCs和MPPs中的表達水平。
　　2、構建Tcfec逆轉錄病毒過表達體系。
　　3、通過體內、體外實驗研究過表達Tcfec對HS

2、Cs的功能影響。
　　方法：
　　1、分選高純度HSCs和MPPs細胞群，MySeq測序儀進行RNA-Seq測序并獲得原始測序數據(Rawdata)。利用生物信息學技術深入分析，獲得了HSCs及MPPs細胞的轉錄因子表達差異譜。
　　2、q-PCR分析Tcfec在HSCs和MPPs中的表達水平。
　　3、利用逆轉錄病毒過表達系統(tǒng)，將小鼠Tcfec基因的開放閱讀框（Openreadingframe,ORF）構建到過

3、表達載體，并用細胞轉染、熒光定量PCR方法驗證過表達體系的構建。
　　4、將流式分選的陽性細胞（感染過表達病毒載體的小鼠胎肝Lin-細胞）移植到經致死劑量輻照處理的受體鼠，構建體內移植動物模型。
　　5、流式細胞儀檢測移植細胞的陽性率和對骨髓造血譜系分化影響的相關檢測。
　　6、流式細胞儀檢測Tcfec對HSPC細胞周期的影響。
　　7、利用體外克隆形成實驗，研究Tcfec對體外克隆形成的影響效果。
　　結

4、果：
　　1、Tcfec在HSCs相對MPPs高表達。
　　2、成功構建Tcfec過表達載體。
　　3、移植16周后，Tcfec組中陽性細胞比例占有優(yōu)勢，血細胞各譜系分化完全正常。
　　4、過表達Tcfec的HSCs及MPPs細胞庫總體數量增加，但對CMP、GMP、MEP祖細胞庫無影響。
　　5、Tcfec對于HSPC的細胞周期沒有影響。
　　6、Tcfec組體外形成的混合細胞型克?。℅EMM）較對照