Lx2-32c抗前列腺癌增殖活性及機(jī)制研究.pdf

1、目的：Docetaxel是治療激素非依賴性前列腺癌的一線化療藥物，通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)微管聚集，誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯于G2/M期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡揮抗腫瘤效果。在臨床實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中Docetaxel對(duì)激素非依賴性前列腺癌顯示出明顯的治療效果，但也存在出現(xiàn)獲得性耐藥等?，F(xiàn)難題。因此，基于公認(rèn)的藥物靶點(diǎn)，尋找具有更強(qiáng)抗腫瘤活性的藥物一直是本領(lǐng)域的研究重點(diǎn)和熱點(diǎn)。前期研究顯示新型紫杉烷類化合物L(fēng)x2-32c對(duì)微管蛋白的促聚合能力顯著強(qiáng)于Docetaxel，提示

2、Lx2-32c可能對(duì)前列腺癌顯示出更強(qiáng)的抗增殖活性。本研究將通過(guò)較系統(tǒng)的體外、體內(nèi)抗腫瘤模型明確Lx2-32c對(duì)前列腺癌的生長(zhǎng)抑制活性，并在此基礎(chǔ)之上探索其發(fā)揮作用的機(jī)制。
　　方法：1、使用MTT法檢測(cè)Lx2-32c對(duì)細(xì)胞增殖的影響，并計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50)；2、使用Honchest33324標(biāo)記細(xì)胞核或使用免疫熒光染色法標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的微管，在熒光顯微鏡下觀察Lx2-32c對(duì)細(xì)胞核形態(tài)及細(xì)胞內(nèi)微管的影響；3、使用流式細(xì)胞儀檢

3、測(cè)并分析化合物對(duì)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響；4、使用Western blot法檢測(cè)Lx2-32c對(duì)細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白ATF3、P53及細(xì)胞凋亡標(biāo)記物cleaved-PARP表達(dá)的影響；5、建立異體移植瘤模型檢測(cè)Lx2-32c對(duì)前列腺癌細(xì)胞體內(nèi)移植瘤生長(zhǎng)的影響；6、使用siRNA沉默LNCaP細(xì)胞內(nèi)的ATF3，觀察ATF3對(duì)Lx2-32c細(xì)胞增殖抑制活性的影響。結(jié)果：1、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Lx2-32對(duì)LNCaP、PC3、DU145、RM

4、-1前列腺癌細(xì)胞的IC50值分別為2.57±0.71 nM、2.94±0.57 nM、7.17±1.28 nM及4.22±0.39 nM；Docetaxel對(duì)上述細(xì)胞的IC50值分別為4.41±1.64 nM、9.37±2.30 nM、11.89±1.56 nM、12.45±2.89 nM。表明Lx2-32c對(duì)多種前列腺癌均具有明顯的增殖抑制能力；2、熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示：與對(duì)照組細(xì)胞相比，Lx2-32c組及Docetaxel組細(xì)胞的

5、細(xì)胞核出現(xiàn)明顯的碎裂現(xiàn)象；Lx2-32c組及Docetaxel組細(xì)胞微管形態(tài)出現(xiàn)異常變化，細(xì)胞內(nèi)微管呈束狀分布，少數(shù)細(xì)胞縮小成明亮的綠色小球狀。表明Lx2-32c具有促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞微管聚集并誘導(dǎo)凋亡的能力。3、流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示：與對(duì)照組細(xì)胞相比，Lx2-32c及Docetaxel作用24 h后處于G2/M期細(xì)胞的比例明顯升高；作用48 h后處于sub-G0期細(xì)胞的比例顯著增高。表明Lx2-32c具有阻滯前列腺癌細(xì)胞周期于G2/M

6、期的能力。4、Western blot結(jié)果顯示：與對(duì)照組細(xì)胞相比，Lx2-32c及Docetaxel可以顯著升高細(xì)胞內(nèi)cleaved-PARP蛋白的表達(dá)；并可誘導(dǎo)LNCaP細(xì)胞內(nèi)ATF3及P53的表達(dá)升高。表明Lx2-32c具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力。5、在小鼠前列腺癌細(xì)胞RM-1體內(nèi)移植瘤模型中，Docetaxel在10 mg/kg劑量的腫瘤抑制率為47％；Lx2-32c在10 mg/kg、20 mg/kg及30 mg/kg劑量的腫瘤抑制

7、率分別為9%、60%、61%。表明Lx2-32c具有抑制RM-1在C57BL/6小鼠體內(nèi)增殖的能力。6、在人前列腺癌細(xì)胞LNCaP及PC3的Babl/c裸鼠異體移植瘤模型中，Docetaxel在10 mg/kg劑量對(duì)兩種模型的腫瘤抑制率分別為94%和90%；Lx2-32c在10 mg/kg及20 mg/kg劑量對(duì)兩種模型的腫瘤抑制率分別為89%、98%和88%、90%。表明Lx2-32c具有抑制LNCaP、PC3在Babl/c裸鼠體內(nèi)增

8、殖的能力。7、MTT結(jié)果顯示：下調(diào)LNCaP細(xì)胞內(nèi)ATF3蛋白的表達(dá)對(duì)Lx2-32c細(xì)胞毒性無(wú)顯著影響。表明ATF3在Lx2-32c抗增殖作用中并不發(fā)揮主要作用。
　　結(jié)論：1、Lx2-32c在體外、體內(nèi)對(duì)前列腺癌細(xì)胞均顯示出較強(qiáng)的增殖抑制活性，相同實(shí)驗(yàn)條件下與Docetaxel相比，體外活性更強(qiáng)、體內(nèi)活性相當(dāng)。2、Lx2-32c的抗腫瘤作用與它促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)微管聚集，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯于G2/M期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。
　　研究創(chuàng)