核LDH-A在食管鱗癌中的表達(dá)情況及意義.pdf

1、目的：
　　食管癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，主要包括兩種亞型：鱗癌和腺癌，其中鱗癌約占90％。我國(guó)是食管癌的高發(fā)區(qū)，尤以鱗癌為主，具有發(fā)病率高、死亡率高的特點(diǎn)。由于食管癌早期癥狀不明顯，患者就診時(shí)多屬于中晚期，其5年總生存率僅約17%。尋找與預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)記物對(duì)于食管癌的個(gè)體化治療意義重大，能夠?yàn)榕R床診斷、個(gè)體化治療提供依據(jù)。
　　LDH是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，包括A、B兩種亞基，LDH-A除了位于細(xì)胞漿，也在細(xì)胞核中表達(dá)

2、。本文對(duì)食管鱗癌組織標(biāo)本中LDH-A核表達(dá)和漿表達(dá)水平單獨(dú)進(jìn)行評(píng)價(jià)，分別分析其與食管鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系及對(duì)預(yù)后的影響，分析核LDH-A是否能夠作為食管鱗癌新的預(yù)后指標(biāo)，并在細(xì)胞水平對(duì)其功能進(jìn)行探索，研究核LDH-A在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮的功能，以期望未來(lái)通過(guò)評(píng)價(jià)LDH-A的亞細(xì)胞定位對(duì)食管鱗癌患者的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和臨床治療提供參考。
　　方法：
　　1、收集臨床上確診為食管鱗癌患者的組織標(biāo)本及相應(yīng)的臨床病理資料及隨訪(fǎng)

3、資料，輸入電腦，建立數(shù)據(jù)庫(kù)。
　　2、檢測(cè)并評(píng)價(jià) LDH-A在癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況：免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè) LDH-A在癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，根據(jù)表達(dá)強(qiáng)度和表達(dá)范圍分別對(duì) LDH-A在癌組織及癌旁組織細(xì)胞不同部位的表達(dá)情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。根據(jù)免疫組化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，核、漿表達(dá)水平均可以分為陰性、弱表達(dá)、中度表達(dá)和強(qiáng)表達(dá)4個(gè)等級(jí)，將陰性和弱表達(dá)歸為低表達(dá)組，中度表達(dá)和強(qiáng)表達(dá)歸為高表達(dá)組，再對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　3、

4、χ2檢驗(yàn)分別分析LDH-A核、漿表達(dá)在癌組織和癌旁組織間的差異。
　　4、分別分析 LDH-A核表達(dá)、漿表達(dá)水平與食管鱗癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系以及對(duì)預(yù)后的影響；運(yùn)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析各暴露因素對(duì)患者死亡風(fēng)險(xiǎn)的影響。
　　5、檢測(cè)LDH-A對(duì)食管癌細(xì)胞增殖的影響：細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)LDH-A在兩株食管癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況；克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè) LDH抑制劑 Galloflavin對(duì)食管癌細(xì)胞株增殖能力的影響；Wes

5、tern blot檢測(cè)LDH抑制劑Galloflavin對(duì)食管癌細(xì)胞株中與腫瘤發(fā)展相關(guān)基因蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果顯示，在癌組織的細(xì)胞核、漿部位均能檢測(cè)到LDH-A的表達(dá)。LDH-A在癌組織中的表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于癌旁組織，在84例患者的癌組織標(biāo)本中，有47例患者為L(zhǎng)DH-A核低表達(dá)，占56%；37例患者為L(zhǎng)DH-A核高表達(dá)，占44%。而有52例患者為L(zhǎng)DH-A漿高表達(dá)，所占比例高達(dá)61.9%

6、。
　　2、LDH-A核表達(dá)水平與患者性別、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P=0.005,0.026,0.022）。LDH-A漿表達(dá)水平與患者性別、年齡相關(guān)（P=0.025,0.012）。其中男性患者核、漿高表達(dá)所占的比例均高于女性；晚期患者和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，LDH-A核高表達(dá)所占的比例明顯高于早期患者和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。
　　3、84例患者的術(shù)后生存期從1個(gè)月到83個(gè)月不等，平均生存期和中位生存期分別是27.08個(gè)月和

7、16個(gè)月，3年總生存率為16.9%。單因素生存分析結(jié)果顯示，腫瘤分期、LDH-A核、漿表達(dá)水平均會(huì)影響患者的預(yù)后（P=0.039,0.004,0.038）。晚期患者、LDH-A核高表達(dá)患者或者LDH-A漿高表達(dá)患者，他們的平均生存期和中位生存期都是明顯縮短的；當(dāng)然，LDH-A核、漿均高表達(dá)的患者的預(yù)后是最差的（P＜0.001）。
　　4、多因素生存分析顯示，與腫瘤分期、LDH-A漿表達(dá)水平相比，LDH-A核高表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的危險(xiǎn)因

8、子，風(fēng)險(xiǎn)比為2.108。
　　5、免疫熒光共聚焦顯微鏡觀(guān)察，LDH-A在食管癌細(xì)胞株Eca109和Eca9706中，不僅在細(xì)胞漿中表達(dá)，在細(xì)胞核中也被檢測(cè)到，與組織中的表達(dá)定位一致；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，加入抑制劑后，細(xì)胞的平板克隆形成能力明顯降低，不僅克隆形成個(gè)數(shù)減少，每個(gè)克隆中的細(xì)胞數(shù)也明顯減少；Western blot結(jié)果顯示，抑制劑Galloflavin處理細(xì)胞48h后，p-stat3和cyclinD1的蛋白表達(dá)水平明

9、顯下降。
　　結(jié)論：
　　1、LDH-A在食管鱗癌患者組織中的表達(dá)不僅存在于細(xì)胞漿中，且細(xì)胞核中也有表達(dá)；LDH-A在癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織。
　　2、LDH-A核表達(dá)水平與患者的性別、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　3、LDH-A核、漿表達(dá)水平均對(duì)患者的預(yù)后有影響，核LDH-A對(duì)患者預(yù)后的影響更大，是一個(gè)獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，可以作為一個(gè)新的預(yù)后指標(biāo)。
　　4、LDH抑制劑 Galloflavin在