纖維蛋白原的氧化、硝化損傷對其二級結(jié)構(gòu)及生物活性的影響.pdf

1、過氧亞硝酸根離子(ONOO-)和過氧化氫(H2O2)具有很強(qiáng)的硝化和氧化能力，可以在生理或病理?xiàng)l件下，對蛋白質(zhì)進(jìn)行翻譯后修飾過程。這種修飾可造成蛋白質(zhì)氧化、硝化、導(dǎo)致蛋白質(zhì)的變性，產(chǎn)生一系列的細(xì)胞毒性作用，并最終可能引發(fā)疾病。金屬Cu(II)參與ONOO-介導(dǎo)的硝化反應(yīng)過程，這不僅會加劇酪氨酸的損傷，更重要的是可能會提高相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)率。纖維蛋白原是人體血漿中的重要蛋白質(zhì)，是血漿蛋白中易被氧化、硝化攻擊的蛋白質(zhì)。其主要生理功能是參與凝

2、血的最后一步，在凝血酶的作用下釋放出纖維蛋白單體，并共價(jià)交聯(lián)為穩(wěn)定的可溶性蛋白纖維。它是冠心病發(fā)病的危險(xiǎn)因素之一，有研究表明纖維蛋白原可導(dǎo)致體內(nèi)的血黏度升高，血小板聚集性增強(qiáng)，冠狀動脈血栓發(fā)生率增加，促進(jìn)冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生。 本文以纖維蛋白原為對象，探討了ONOO-和H2O2對纖維蛋白原結(jié)構(gòu)的改變以及由此引發(fā)生物活性降低的關(guān)系。并在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究Cu(II)對ONOO-損傷纖維蛋白原的促進(jìn)作用。該研究結(jié)果對揭示ONO

3、O-的生理作用機(jī)制，了解相關(guān)疾病的發(fā)病因素并進(jìn)行預(yù)防或治療有著重要意義。采用經(jīng)過本實(shí)驗(yàn)室改良的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)M體內(nèi)環(huán)境的方法，研究了ONOO-、H2O2和Cu(II)介導(dǎo)纖維蛋白原硝化損傷的時(shí)間過程。為了闡明纖維蛋白原氧化、硝化對蛋白結(jié)構(gòu)的影響，我們采用衰減全反射傅里葉變換紅外光譜(ATR-FTIR)對硝化蛋白的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，硝化和氧化損傷都對纖維蛋白原分子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了很大影響：α-螺旋主體結(jié)構(gòu)向β-片層轉(zhuǎn)變，但氧化損傷的作用更為明

4、顯。PN和H2O2損傷后，α-螺旋結(jié)構(gòu)含量由原來的38．03．％分別降至29．69％和20．06％，β片層結(jié)構(gòu)含量由原來的29．89％分別增至43．66％和40．63％。這種結(jié)構(gòu)特征的變化，會破壞甚至抑制其與凝血酶的聚合作用，使其原有功能喪失，推測主要與Fg的Aα的α-羧基端的變化有關(guān)。利用凝固時(shí)間為指標(biāo)，以Von Clauss法檢測纖維蛋白的凝聚活性，研究二級結(jié)構(gòu)的改變對其生理活性的影響；并進(jìn)一步研究之間的關(guān)系；在此基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)硝化和