異常纖維蛋白原的臨床和基礎(chǔ)研究.pdf

1、纖維蛋白原分子是由Aα、Bβ和γ鏈通過(guò)29對(duì)二硫鍵連接而成的六聚體，分子量為340kDa。纖維蛋白原3條肽鏈分別由簇集于4q28-4q31約50 kb內(nèi)的3個(gè)獨(dú)立基因 FGA、FGB和FGG編碼。纖維蛋白原分子有個(gè)基本功能：一是，作為血小板膜糖蛋白Iib/IIIa的受體，參與血小板的活化聚集；二是，在凝血酶作用下，從纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白凝塊。然而，目前對(duì)于纖維蛋白原的代謝尚有許多未解之處。通過(guò)對(duì)纖維蛋白原異常特別是遺傳性纖維蛋白原缺

2、陷的研究，有助于深入了解纖維蛋白原功能和代謝。纖維蛋白原異常通常分為高纖維蛋白原血癥、低纖維蛋白原血癥、無(wú)纖維蛋白原血癥、異常纖維蛋白原血癥和低異常纖維蛋白原血癥5種類(lèi)型。我們?cè)诠ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)高纖維蛋白原血癥、低纖維蛋白原血癥和低異常纖維蛋白原血癥患者各一例，我們對(duì)其病因和發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了研究。本研究分為三個(gè)部分：
　　 第一部分：高纖維蛋白原血癥對(duì)凝血時(shí)間的影響。
　　 目的：診斷一例Turner 綜合征合并有肝細(xì)胞肝癌患者

3、；證實(shí)高纖維蛋白原血癥致凝血時(shí)間延長(zhǎng)。
　　 方法：根據(jù)凝固法原理檢測(cè)患者手術(shù)前后血漿活化部分凝血酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間 (PT)和 凝血酶時(shí)間(TT)；運(yùn)用Clauss法、免疫比濁法和Western blot分析血漿中纖維蛋白原水平；PCR擴(kuò)增編碼纖維蛋白原三肽鏈基因(FGA、FGB和 FGG)的所有外顯子以及外顯子和內(nèi)含子交界區(qū)，并直接測(cè)序分析；免疫組化法分析癌組織中纖維蛋白原的表達(dá)；免疫法檢測(cè)患者血漿皮質(zhì)醇、白介

4、素-6和可溶性組織因子(sTF)的濃度。
　　 結(jié)果：癌組織中纖維蛋白原的表達(dá)高于對(duì)照；手術(shù)前患者血漿纖維蛋白原抗原和活性分別為15.1±0.3 g/l和14.4±0.8 g/l。手術(shù)前血漿中纖維蛋白原及其組分和代謝產(chǎn)物泳動(dòng)速率與正常對(duì)照比較無(wú)差異，而灰度明顯加深?；驕y(cè)序未發(fā)現(xiàn)堿基改變。血漿IL-6、皮質(zhì)醇水平和sTF明顯高于對(duì)照。血漿中纖維蛋白原被吸附逐漸降至正常后，延長(zhǎng)的APTT、PT和TT值逐漸恢復(fù)正常。腫瘤被切除后，血

5、漿纖維蛋白原水平、延長(zhǎng)的凝血時(shí)間和升高的炎癥因子均降至正常。
　　 結(jié)論：Turner 綜合征合并有巨塊型肝癌診斷明確；巨塊型肝癌和高血漿IL-6和皮質(zhì)醇水平是高纖維蛋白原血癥的原因；高纖維蛋白原導(dǎo)致APTT、PT和 TT值明顯延長(zhǎng)；高纖維蛋白原延長(zhǎng)PT和TT值的作用被高血漿組織因子水平削弱。
　　 第二部分：纖維蛋白原Aα鏈Arg16His突變致遺傳性異常纖維蛋白原血癥。
　　 目的：對(duì)一例遺傳性異常纖維蛋白原

6、血癥家系進(jìn)行表型和基因型分析。
　　 方法：采集家系3代6人外周血，血凝儀檢測(cè)APTT、PT和TT。纖維蛋白原活性和抗原分別用Clauss法和免疫比濁法檢測(cè)，western blot分析血漿纖維蛋白原及其片斷分布。PCR擴(kuò)增纖維蛋白原基因FGA、FGB和FGG所有外顯子及其側(cè)翼序列，PCR產(chǎn)物純化后直接測(cè)序。
　　 結(jié)果：先證者APTT、PT正常，TT明顯延長(zhǎng)；纖維蛋白原抗原正常，活性降低；先證者母親和胞姐表型與之相似。

7、基因分析顯示先證者纖維蛋白原FGA基因2號(hào)外顯子G1233→A雜合堿基改變(密碼子CGT→CAT)，導(dǎo)致Arg16His錯(cuò)義突變，該突變?cè)从谀赶怠?br>　　 結(jié)論：纖維蛋白原Aα鏈Arg16His雜合錯(cuò)義突變是遺傳性異常纖維蛋白原血癥的分子基礎(chǔ)。
　　 第三部分：纖維蛋白原Bβ鏈基因4個(gè)堿基插入突變導(dǎo)致遺傳性低異常。
　　 目的：對(duì)一例遺傳性低異常纖維蛋白原血癥家系的病因和發(fā)病機(jī)制進(jìn)行初步研究。
　　 方法：

8、采集家系4代16人外周血，血凝儀檢測(cè)APTT、PT、TT和纖維蛋白原活性(Clauss法)；免疫比濁法和ELISA法檢測(cè)纖維蛋白原抗原；Western blot分析纖維蛋白原抗體的特異性和血漿纖維蛋白原γ鏈的表達(dá)；PCR擴(kuò)增纖維蛋白原基因并直接測(cè)序。
　　 結(jié)果：先證者的凝血時(shí)間明顯延長(zhǎng)：APTT 76.5 sec (N 28-40 sec)，PT 79.5 sec (N 11-14.5 sec)，TT 79.1 sec (N

9、14-21 sec)；纖維蛋白原活性無(wú)法檢測(cè)，抗原量0.43 g/l (N 2.0-5.0 g/l)；家系其他成員的APTT、PT和TT值均正常，先證者父親、母親、胞弟和兒子的血漿纖維蛋白原活性比正常對(duì)照略低?；蚍治霭l(fā)現(xiàn)先證者FGB exon 2 核苷酸 2819～2820之間插入GTTT，該突變?yōu)榧兒细淖?，?dǎo)致纖維蛋白原分子Bβ鏈在40位氨基酸處發(fā)生移碼并在50位氨基酸處提前終止，該突變?cè)谙茸C者父母親、胞弟和兒子為雜合狀態(tài)。纖維蛋白