三物白散對TGF-β1誘導人肺泡上皮細胞A549細胞EMT作用研究.pdf

1、目的:
　　觀察三物白散對體外經(jīng)TGF-β1誘導后A549細胞的增殖抑制作用、不同時間點三物白散對其細胞上清液分泌的IFN-r、IL-4、VEGF水平的影響以及a-SMA、E-cad、MAPK家族P38MAPK和P-P38MAPK蛋白表達的影響，探討在三物白散干預下可能對TGFβ1-EMT進程中的作用機制，從而研究三物白散與肺間質纖維化(PF)的關系，為PF的中醫(yī)臨床治療提供新的思路和切入點。
　　方法:
　　對無血清

2、培養(yǎng)基饑餓過夜后、生長狀態(tài)良好的A549細胞隨機分為7組:取1組作為空白組加入6ml完全培養(yǎng)液，1組加入TGF-β1至完全培養(yǎng)液中(TGF-β1終濃度為5ng/ml)作為模型組，其余5組藥物組分別為SWB極低、低、中、高劑量組(SWB藥液終分別為10-6、10-5、10-4、10-3g/ml)和西藥組。
　?、俨捎肕TT法檢測不同濃度的三物白散對TGF-β1誘導的A549細胞在24、48、72h時的增殖抑制作用，選取合適藥物濃度、

3、藥物作用時間。
　　②借助顯微鏡觀察24、48h時各組A549細胞形態(tài)的改變。
　?、鄄捎肊LISA法于24、48h兩個時間點，檢測各組細胞上清液中VEGF、IL-4、IFN-r的分泌表達水平。
　?、苓x用weaern-blot法檢測24h、48h時各組E-cad、a-SMA、P38MAPK和P-P38MAPK的蛋白表達情況。
　　結果:
　　三物白散對體外經(jīng)TGF-β1誘導后A549細胞的增殖抑制作用:2

4、4h時，三物白散的高、中劑量組對經(jīng)TGF-β1誘導的A549細胞有抑制作用，且藥物對細胞的抑制率與藥物濃度呈正比的關系，高劑量組的抑制率為23.68％;48h時，三物白散設定的四個濃度對細胞的抑制率相較于模型組都有明顯的抑制作用，呈拋物線趨勢，其中，中劑量組的抑制率最高達到了33.4％;72h時三物白散各藥物濃度對細胞的抑制率與48h時藥物抑制趨勢一致但均低于48h的各對應組。
　　顯微鏡下觀察A549在TGF-β1的作用下，細胞

5、形態(tài)由原先鵝卵石狀向條梭放射狀轉變，并在48h時相對于24h時A549細胞的條梭狀改變更為明顯。
　　ELISA結果顯示:VEGF、IL-4在模型組細胞上清液中的表達較相應的空白組均顯著上升，IFN-r的表達明顯下降;藥物組VEGF、IL-4在細胞上清液中含量與相應模型組相比，皆有不同程度的下調，藥物組IFN-r在細胞上清中的表達量與其同時間點模型組的含量相比，顯著增高，其差別具有統(tǒng)計性意義。其中高、中劑量組的藥效作用要略優(yōu)于低劑

6、量組，但高、中劑量組的組間差異不明顯。
　　western-blot法檢測結果顯示:A549經(jīng)TGF-β1刺激24h、48h后（與空白組相比），a-SMA、P-P38MAPK表達明顯增加;E-cad表達下調;P38MAPK蛋白表達變化不明顯。經(jīng)三物白散干預之后與相應模型組相比，藥物組a-SMA、P-P38MAPK的表達量均有程度不同的下調，E-cad蛋白相應表達增加，其差別具有統(tǒng)計學意義;藥物組P38MAPK蛋白表達較模型組有一定

7、下調趨勢，但僅在24h高劑量組，48h中劑量組蛋白下調量有統(tǒng)計學意義。
　　結論:
　　①TGF-β1可誘導A549細胞向間充質細胞轉分化。
　　②48小時時，中劑量組三物白散對經(jīng)TGF-β1誘導下A549細胞的增殖抑制率最明顯。
　　③三物白散可能通過調節(jié)經(jīng)TGF-β1誘導的A549細胞EMT體外模型中細胞因子IFN-r、IL-4、VEGF的濃度表達水平而起到抑制肺纖維化病情進程的作用。
　?、苋锇咨⒖?/p>