PI3K-AKT信號通路在骨結核發(fā)病中骨破壞機制的研究.pdf

1、目的：在體外模擬骨關節(jié)結核發(fā)病過程中的骨破壞機制，探討骨關節(jié)結核發(fā)病過程中 P13K/AKT信號通路在骨破壞中的作用機制。試圖通過實驗研究闡明骨關節(jié)結核發(fā)病環(huán)節(jié)中P13K/AKT信號通路對于骨破壞機制的影響。為將來的診斷及治療提供新的參考。
　　方法:（1）采用不同濃度結核桿菌超聲裂解產(chǎn)物誘導RAW264.7破骨細胞培養(yǎng)，體外模擬骨關節(jié)結核的骨破壞機制，用TRAP染色法(抗酒石酸酸性磷酸酶染色法)染色并計數(shù)，觀察破骨細胞分化能力的

2、變化。(2)采用結核桿菌超聲裂解產(chǎn)物誘導 RAW264.7培養(yǎng)破骨細胞，加入不同濃度的特異性阻斷劑LY294002(5uM，10uM，20uM)，蛋白免疫印跡實驗(western-bolt)檢測相關信號蛋白AKT,p-AKT的表達；并用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并計數(shù)，觀察破骨細胞分化能力的變化。
　　結果：（1）培養(yǎng)7d后鏡下均可見細胞貼壁生長，結核桿菌超聲裂解產(chǎn)物作用于RAW264.7細胞可見大量單個長梭或類圓形細胞，

3、隨培養(yǎng)時間延長逐漸增多，體積增大。細胞作TRAP染色，顯示有大量的TRAP陽性細胞形成。骨磨片可見吸收陷窩形成，證明結核桿菌超聲裂解產(chǎn)物能誘導RAW264.7細胞向破骨細胞分化，導致骨質破壞。（2）結核桿菌超聲裂解產(chǎn)物能作用RAW264.7細胞后P13K／Akt信號通路下游分子AKT及p-AKT表達顯著增加(P<0.05)。加入特異性抑制劑LY294002阻斷后，AKT、p-AKT出現(xiàn)了劑量依賴性降低(P<0.05)。該結果證實 LY2

4、94002成功阻斷了 P13K／AKT信號通路，并抑制誘導結核桿菌超聲裂解產(chǎn)物誘導RAW264.7細胞向破骨細胞分化，抑制骨吸收作用。
　　結論:（1）一定濃度范圍內(nèi)的結核分枝桿菌超聲裂解物（MTUS）能誘導RAW264.7細胞向破骨細胞（OC）分化成熟；（2）高濃度的結核分枝桿菌超聲裂解物（MTUS）可導致RAW264.7細胞直接死亡，無法誘導成為破骨細胞，考慮與細菌毒力過強所致；（3）在結核分枝桿菌超聲裂解物（MTUS）誘導