PI3K-Akt通路及其抑制劑LY294002在肺癌發(fā)病機(jī)制及治療中的作用研究.pdf

1、授予單位代碼學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)柮芗?jí)鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文1045920032078論文題目：雕湫器麓躺勰在作者姓名：學(xué)科門類：專業(yè)名稱：導(dǎo)師姓名、職稱：王靜醫(yī)學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)吳逸明教授二零零六年五月2006屆鄭州大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文P13副Ah通路及其抑制劑1Y294002在肺癌發(fā)病機(jī)制及治療中的作用研究材料和方法1肺癌組織實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組為手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本80例，其中男53例，女27例。鱗癌44例，其中高分化鱗癌16例，

2、中分化鱗癌13例，低分化鱗癌15例；腺癌36例，其中高中分化腺癌20例，低分化腺癌16例。臨床分期：依據(jù)1997年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(uICC)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，III期59例，IIIⅣ期21例(其中I期36例，II期23例，III期19例，Ⅳ期2例)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例。良性肺組織標(biāo)本35例(支氣管擴(kuò)張10例，肺結(jié)核18例，炎性假瘤7例)作為對(duì)照組。標(biāo)本用10％福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，制成厚舡m的切片，用蘇木素一伊紅(

3、HE)染色和免疫組織化學(xué)(sP法)檢測(cè)標(biāo)本Akt2、pAkt蛋白的表達(dá)。2體外實(shí)驗(yàn)21用含10％胎牛血清的F12K培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞。以濃度為(5、10、20、4嘰mol／L)的LY294002干預(yù)A549細(xì)胞24h，以免疫細(xì)胞化學(xué)法(SP法)及westernblot檢測(cè)A549細(xì)胞Akt2、pAkl、vEGF、MMP9及Bcl2蛋白的表達(dá)。22培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞，LY294002(5、10、20、4吮mol／L)

4、干預(yù)24h，48h、72h，LY294002與順鉑(DDP)及n7294002與紫杉醇聯(lián)用干預(yù)A549細(xì)胞24h，MTT法檢測(cè)490nm波長(zhǎng)處吸光度爿，計(jì)算對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。23LY294002(5、10、20、4毗mol／L)干預(yù)24h，DDP(3肛∥m1)、紫杉醇(O銣g／m1)及LY294002(2q“mol／L)與后2者聯(lián)用干預(yù)A549細(xì)胞24h，電鏡觀察細(xì)胞干預(yù)前后的變化；流式細(xì)胞術(shù)分析A549細(xì)胞細(xì)胞周期及凋亡率。3體內(nèi)實(shí)

5、驗(yàn)3136只裸鼠，于A549細(xì)胞接種1周腫瘤長(zhǎng)出后，隨機(jī)分為6組。LY294002(L，Y29400225mg／kg，腹腔注射)；DDP組(DDP4mg／蠔，腹腔注射)：紫杉醇組(紫杉醇20Illg／kg，腹腔注射)；LY294002DDP組(LⅣ29400225mg／塢DDP4lIlg／蠔，腹腔注射)，I_Y294002紫杉醇組(L一29400225mg／塢紫杉醇20mg／kg腹腔注射)，對(duì)照組用等容量生理鹽水腹腔注射。以上藥物L(fēng)Y2