矢車菊素-3-O-葡萄糖苷對鉛引起的睪丸間質(zhì)細胞R2C孕酮合成降低的干預作用.pdf

1、目的：采用鉛（Pb2+）損傷的睪丸間質(zhì)細胞R2C細胞為模型，以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷（Cyanidin-3-O-glucoside，C3G）為營養(yǎng)因子，研究C3G對Pb暴露引起的R2C細胞孕酮合成下降的干預作用。
　　方法：通過放射性免疫技術（Radioimmunoassay，RIA）檢測培養(yǎng)液中的孕酮含量以篩選Pb的造模濃度。接著用選定的Pb濃度和一系列C3G濃度作用于細胞，以CCK8試劑盒測定細胞活性，在顯微鏡下觀察細胞形

2、態(tài)，以RIA技術檢測培養(yǎng)液中的孕酮含量，以化學發(fā)光法（Chemiluminescence，CL）分析活性氧簇（Reactive Oxygen Species，ROS）水平，以流式細胞術(Flow Cytometry，F(xiàn)CM)分析線粒體膜電位（Mitochondrial Membrane Potential，MMP）降低的細胞比例，以Western Blot方法分析孕酮合成、PKA-ERK1/2通路，和抗氧化關鍵蛋白表達水平。
　　

3、結果：以暴露于100μM Pb的R2C細胞作為損傷模型，12.5,25，50或100μM C3G為營養(yǎng)因子，與Pb共同作用于細胞。Pb作用48h后細胞活性降低，12.5,25,50μM C3G可使細胞活性相對于Pb組上升。Pb作用24h后細胞活性沒有顯著變化，但培養(yǎng)液中孕酮含量顯著降低，12.5,25,50μM C3G可使孕酮含量上升。Pb作用24h后膽固醇跨線粒體膜轉運蛋白StAR、孕酮合成關鍵酶3β-HSD和CYP11A1表達量下降

4、，類固醇激素合成通路PKA蛋白表達量下降，p-ERK1/2與ERK1/2蛋白表達量之比下降，25μM C3G可使這些蛋白表達量或者表達量之比上調(diào)。Pb作用24h后抗氧化酶SOD2、CAT的表達量顯著下調(diào)，25、12.5μM C3G均使兩種蛋白表達量上調(diào)。Pb作用24h后MMP損傷率顯著上升，所有C3G劑量組均使MMP損傷率下降。Pb作用0-160min可使細胞的ROS水平顯著上升，所有C3G劑量組均可使ROS下降，其中Pb+12.5μM