木犀草素-7-0-葡萄糖苷對(duì)心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、心血管疾病是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的重大疾病，具有高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率等特點(diǎn)，發(fā)病年齡有年輕化的趨勢(shì)。心肌損傷類(lèi)型包括局部缺血性損傷、缺血再灌注損傷、缺氧損傷、心肌肥大、缺氧/復(fù)氧損傷、氧化應(yīng)激損傷、高磷血癥引起的心肌損傷、癌癥患者化療藥物引起的損傷等。其中，癌癥治療的化學(xué)療法會(huì)導(dǎo)致短期或者長(zhǎng)期的心臟血管的并發(fā)癥。在癌癥患者化學(xué)療法誘導(dǎo)的心肌毒性的藥物中，葸環(huán)類(lèi)抗生素是主要的毒性藥物，由此限制了它的臨床應(yīng)用。而心肌細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)缺乏在臨床

2、上也是普遍發(fā)生的，它介導(dǎo)多種心臟局部缺血病理過(guò)程，比如冠心病和心力衰竭等，在此過(guò)程中會(huì)發(fā)生自噬的激活，最終心肌細(xì)胞存活或者死亡。從天然植物中尋找新型、高效的具有心肌保護(hù)作用的藥物仍是藥學(xué)研究的重點(diǎn)之一。
　　中藥作用范圍廣，毒副作用少，能有效地清除氧自由基抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用和調(diào)節(jié)鈣離子穩(wěn)定，從而保護(hù)心肌細(xì)胞損傷。青蘭屬植物為多年生草本植物，廣泛分布于我國(guó)西北地區(qū)。其地上全草所含總黃酮靜脈滴注可以有效緩解犬急性心肌缺血，縮小急性心肌梗

3、死面積，冠脈流量明顯增加。為尋找對(duì)心肌細(xì)胞有保護(hù)作用的有效成分，開(kāi)發(fā)利用該植物資源，我院天然藥化教研室對(duì)該植物地上全草進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，通過(guò)對(duì)已提取的化合物進(jìn)行的藥理活性研究，發(fā)現(xiàn)木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin-7-O-Glucoside，LUTG)對(duì)心肌損傷有一定保護(hù)作用。前期研究表明LUTG預(yù)處理對(duì)多柔比星誘導(dǎo)的心臟毒性有顯著的保護(hù)作用，且對(duì)多柔比星的抗腫瘤活性沒(méi)有影響。但其具體的對(duì)心肌保護(hù)的作用機(jī)制尚不明確。

4、本課題主要通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，研究LUTG對(duì)多柔比星或饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的心血管藥物奠定基礎(chǔ)。
　　LUTG對(duì)多柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用:細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，LUTG明顯抑制多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞損傷;DAPI及吖啶橙染色結(jié)果顯示，LUTG逆轉(zhuǎn)多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞的凋亡;JC-1熒光探針檢測(cè)結(jié)果顯示，LUTG逆轉(zhuǎn)多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞線粒

5、體膜電勢(shì)的去極化，逆轉(zhuǎn)線粒體的損傷;Western blotting結(jié)果顯示，多柔比星處理組p-PTEN的表達(dá)明顯下降，p-Akt，p-ERK，p-mTOR，以及p-GSK-3β的表達(dá)明顯增加;而預(yù)處理LUTG(20μM)，明顯上調(diào)p-PTEN的表達(dá)，明顯下調(diào)p-Akt，p-ERK，p-mTOR，以及p-GSK-3β的表達(dá)。
　　LUTG對(duì)饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用:MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，心肌細(xì)胞的活力隨饑餓時(shí)間依賴(lài)性的降低，

6、自噬抑制劑3-MA降低正常條件及饑餓條件下心肌細(xì)胞的活力。流式和Western blotting結(jié)果顯示，饑餓會(huì)抑制心肌細(xì)胞的周期和細(xì)胞周期蛋白cyclinD1和p21的表達(dá)，并抑制p-Akt，p-mTOR的表達(dá)，而上調(diào)p-ERK的表達(dá)。LUTG預(yù)處理后，MTT結(jié)果顯示，LUTG(5，10，20μM)明顯保護(hù)饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的損傷，而自噬抑制劑3-MA可阻斷LUTG對(duì)饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。Western blotting結(jié)