射頻加熱增強(qiáng)熱啟動(dòng)子誘導(dǎo)下的自殺基因治療乳腺癌：面向介入分子影像引導(dǎo)下的基因治療.pdf

1、目的:
　　通過(guò)研究射頻加熱技術(shù)增強(qiáng)熱啟動(dòng)子誘導(dǎo)下的單純皰疹病毒胸苷激酶/更昔洛韋（herpes simplex virus thymidine kinase/Ganciclovir，HSV-TK/GCV）基因治療系統(tǒng)對(duì)多柔比星耐藥性乳腺癌細(xì)胞的療效，為創(chuàng)建介入分子影像引導(dǎo)下的射頻加熱聯(lián)合基因治療新方法奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　體外實(shí)驗(yàn):腔室內(nèi)四孔板接種人多柔比星耐藥性乳腺癌MCF7/A細(xì)胞，通過(guò)慢病毒將熱啟動(dòng)子引導(dǎo)

2、下的HSV-TK基因?qū)隡CF7/A細(xì)胞。利用熒光鏡檢及qPCR技術(shù)對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。將腔室內(nèi)四孔板置于37℃水浴中，射頻加熱后加更昔洛韋(10ug/ml)處理細(xì)胞。通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡來(lái)評(píng)估熱啟動(dòng)子引導(dǎo)下的基因治療聯(lián)合射頻加熱對(duì)耐藥性乳腺癌細(xì)胞的殺傷效果。
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn):建立裸鼠乳腺癌模型，并將荷瘤裸鼠分成4組:包括對(duì)照組(Control組);射頻加熱組（RFH組）;基因治療組（PHSP-TK組）;及射頻加熱結(jié)合基因治療組（

3、PHSP-TK+RFH組），通過(guò)MRI對(duì)腫瘤大小變化進(jìn)行檢測(cè)。最后通過(guò)病理學(xué)技術(shù)對(duì)照證實(shí)MRI的表現(xiàn)。
　　結(jié)果:
　　熒光鏡檢及qPCR結(jié)果證實(shí)通過(guò)慢病毒導(dǎo)入的熱啟動(dòng)子誘導(dǎo)的TK基因在射頻加熱條件下在乳腺癌細(xì)胞中有大量表達(dá)。PHSP-TK+ RFH組貼壁細(xì)胞數(shù)明顯減少，死亡細(xì)胞明顯增多，與PHSP-TK組及RFH組相比差異顯著(p＜0.01)。流式檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)PHSP-TK+ RFH組腫瘤細(xì)胞的凋亡明顯增加(p＜0.05