類固醇性激素化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的研究.pdf

1、免疫分析方法具有靈敏度高、線性范圍寬、可實現(xiàn)全自動化等優(yōu)點(diǎn)，在生命、環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。它主要包括放射免疫分析、酶免疫分析、熒光免疫分析以及化學(xué)發(fā)光免疫分析等方法。本論文主要圍繞化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，開展了測定類固醇性激素的一系列研究，對大批量樣品篩選和檢測方面有非常重要的學(xué)術(shù)意義和應(yīng)用價值。
　　 全文主要分為五章，分述如下：
　　 第一章在介紹類固醇性激素的種類、來源和作用功能的基礎(chǔ)上，對類固醇性激素檢測技

2、術(shù)和方法進(jìn)行了綜述。此外，本章還概述了化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理、方法和研究進(jìn)展，并對其研究前景進(jìn)行了展望。
　　 第二章建立了一種簡便、快速、高靈敏度的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法測定環(huán)境水中的17β-雌二醇。采用二抗包被的磁顆粒作為免疫分析體系的固相分離劑。本法測定實際樣品時，使用固相萃取方法進(jìn)行樣品前處理，以消除基體效應(yīng)的干擾。除此以外，對各種實驗影響因素（如免疫試劑的稀釋度、免疫反應(yīng)條件、磁顆粒和發(fā)光底物體積、發(fā)光底物反應(yīng)時間和

3、pH值等）進(jìn)行了考查和優(yōu)化。在最優(yōu)條件下，測定E2的線性范圍是20～1200pg/mL，檢測限為2.0pg/mL。體系測定樣品的總時間在45min以內(nèi)，批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10％，加入不同樣品濃度的平均回收率是86.3～108％。本方法已成功用于廢水、河水以及自來水中E2的測定，與商業(yè)化的放射免疫分析（RIA）試劑盒相比，具有良好的相關(guān)性。
　　 第三章以磁性微粒子為載體，建立了一種高靈敏度、高特異性和重現(xiàn)性化學(xué)發(fā)光免疫分析

4、方法，并將其應(yīng)用于血清中雌二醇（E2）的測定。采用二抗包被的磁顆粒作為免疫分析體系的固相分離劑，選擇高靈敏度的辣根過氧化酶（horseradishperoxidase，HRP）催化H2O2-luminol化學(xué)發(fā)光體系作為檢測體系。本方法表現(xiàn)出高特異性，與主要的類固醇激素如：雌酮（E1）、雌三醇（E3）、二氫睪酮（DHT）、雄烯二酮和睪酮等均沒有交叉。阻斷劑三氯醋酸鈉的引入，可以不需要萃取，實現(xiàn)對人血清中雌二醇的直接測定。在最佳條件下，本

5、法測定雌二醇的檢測限為2.51pg/mL，線性范圍為15～1000pg/mL，體系批內(nèi)和批間變異均小于15％。對三種不同加入濃度樣品的平均回收率分別為93.3、106、101％。本方法已成功應(yīng)用到105份臨床人血清樣品的測定，與商品化的放射免疫試劑盒的檢測結(jié)果相關(guān)性良好，其相關(guān)系數(shù)為0.9892。以上結(jié)果可望在開發(fā)國產(chǎn)化化學(xué)發(fā)光診斷試劑盒和全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀中得到應(yīng)用。
　　 第四章本法依據(jù)HRP的標(biāo)記物和雌二醇抗原與一定

6、量的抗體之間的競爭反應(yīng)，采用驢抗兔二抗包被聚苯乙烯板作為免疫分析體系的固相，選擇高靈敏度的辣根過氧化酶催化H2O2-luminol化學(xué)發(fā)光體系作為檢測體系。本方法測定雌二醇的檢測限為1.48pg/mL，并成功應(yīng)用到97份臨床人血清樣品的測定，與商品化的放射免疫試劑盒的檢測結(jié)果相關(guān)性良好，其相關(guān)系數(shù)為0.9881，能夠滿足日常臨床診斷的需求。
　　 第五章采用磁性微粒子作為分散固相及分離劑，以HRP催化H2O2-luminol化學(xué)

7、發(fā)光體系作為檢測體系。在反應(yīng)體系中引入偶聯(lián)羊抗兔二抗的磁性微粒子，并最終形成免疫復(fù)合物。在反復(fù)施加磁場的作用下，通過洗滌將沒有結(jié)合的游離蛋白與免疫復(fù)合物分離，即可實現(xiàn)對待測抗原的測定。在最佳條件下，本法測定孕酮的檢測限為0.2ng/mL，線性范圍為0～100ng/mL，體系批內(nèi)和批間變異均小于11％。以本法測定了70份臨床血清樣品，回收率為82～112％，與商品化進(jìn)口化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒的檢測結(jié)果相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9897。