黃芪甲苷對PC12細胞OGD-R損傷的保護作用及其作用機制研究.pdf

1、目的：探究黃芪甲苷對Na2S204誘導(dǎo)的PC12細胞（大鼠嗜鉻細胞瘤細胞，pheochromocytoma cell）OGD/R損傷的保護作用及其相關(guān)的保護作用機制。
　　方法：采用含有不同濃度的Na2S204（10、8、6、4、2mmol/L）的Earles溶液對PC12細胞進行缺氧缺糖損傷，并用 CCK-8實驗方法篩選出最佳損傷濃度；應(yīng)用尼莫地平為陽性藥，并在Na2S204的最佳損傷濃度條件下，加入不同濃度的尼莫地平（25、5

2、、1μmol/L）進行預(yù)保護，采用CCK-8方法篩選出陽性藥最佳濃度；應(yīng)用CCK-8實驗測定黃芪甲苷對PC12細胞的增殖影響；應(yīng)用顯微鏡觀察黃芪甲苷預(yù)保護后各組細胞形態(tài)學(xué)差異；采用CCK-8方法測定不同濃度黃芪甲苷預(yù)保護后各組細胞的存活率；LDH試劑盒法測定各組細胞的LDH漏出量；Hoechst33342/PI染色法檢測各組細胞凋亡與壞死情況；加入羅丹明123通過熒光分光光度計法測定各組的膜電位；試劑盒法測定不同濃度黃芪甲苷預(yù)保護后各組

3、細胞SOD、MDA、GSH、ROS的含量；采用western blot測定加入PI3K/Akt通道抑制劑LY294002前后各組細胞Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表達量，并用CCK-8實驗測定加入抑制劑LY294002后各組細胞的存活率。
　　結(jié)果：通過CCK-8實驗顯示，Na2S204濃度為10mmol/L時，對PC12細胞缺血/再灌注損傷的細胞存活率在50％左右，與空白組相比具有極顯著性差異（

4、P<0.01），在此種損傷條件下，尼莫地平濃度為5μmol/L時保護作用最強；CCK-8實驗結(jié)果顯示，黃芪甲苷預(yù)保護后能夠提高OGD/R損傷時細胞的存活率，且具有一定的濃度梯度差異；Hoechst33342/PI染色實驗中結(jié)果顯示，隨著黃芪甲苷濃度的升高熒光強度逐漸降低；LDH試劑盒實驗顯示，黃芪甲苷預(yù)保護后加藥組LDH的含量隨藥物濃度的升高而降低；在線粒體膜電位的測定實驗中，黃芪甲苷能夠升高OGD/R損傷時細胞的膜電位；抗氧化試劑盒結(jié)

5、果顯示，黃芪甲苷預(yù)保護后能夠提高OGD/R損傷時細胞SOD、GSH的含量，降低MDA、ROS的含量；通過western blot實驗結(jié)果顯示，在加入PI3K/Akt抑制劑LY294002前，加藥組p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表達量均隨藥物濃度升高而升高，Bax、Caspase-3蛋白表達量隨藥物濃度升高而降低；加入抑制劑后，加藥組p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表達量均降低，Bax與Caspase-3蛋白表達量相對提高。

6、　　結(jié)論：黃芪甲苷在PC12細胞OGD/R損傷時能夠提高細胞的存活率以及線粒體膜電位，降低LDH的漏出量，能夠通過增加SOD、GSH含量并降低MDA、ROS的含量從而減弱細胞氧化應(yīng)激損傷的能力，并能夠通過增加p-Akt/Akt的蛋白含量，進而增加Bcl-2的蛋白表達，降低Bax、Caspase-3的蛋白表達，因此，黃芪甲苷對PC12細胞OGD/R損傷具有保護作用，并且其保護作用機制與抑制氧化應(yīng)激損傷以及PI3K/Akt/Bcl-2信號通