黃芪甲苷對(duì)PC12細(xì)胞OGD-R損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探究黃芪甲苷對(duì)Na2S204誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞（大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞，pheochromocytoma cell）OGD/R損傷的保護(hù)作用及其相關(guān)的保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：采用含有不同濃度的Na2S204（10、8、6、4、2mmol/L）的Earles溶液對(duì)PC12細(xì)胞進(jìn)行缺氧缺糖損傷，并用 CCK-8實(shí)驗(yàn)方法篩選出最佳損傷濃度；應(yīng)用尼莫地平為陽(yáng)性藥，并在Na2S204的最佳損傷濃度條件下，加入不同濃度的尼莫地平（25、5

2、、1μmol/L）進(jìn)行預(yù)保護(hù)，采用CCK-8方法篩選出陽(yáng)性藥最佳濃度；應(yīng)用CCK-8實(shí)驗(yàn)測(cè)定黃芪甲苷對(duì)PC12細(xì)胞的增殖影響；應(yīng)用顯微鏡觀察黃芪甲苷預(yù)保護(hù)后各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)差異；采用CCK-8方法測(cè)定不同濃度黃芪甲苷預(yù)保護(hù)后各組細(xì)胞的存活率；LDH試劑盒法測(cè)定各組細(xì)胞的LDH漏出量；Hoechst33342/PI染色法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡與壞死情況；加入羅丹明123通過(guò)熒光分光光度計(jì)法測(cè)定各組的膜電位；試劑盒法測(cè)定不同濃度黃芪甲苷預(yù)保護(hù)后各組

3、細(xì)胞SOD、MDA、GSH、ROS的含量；采用western blot測(cè)定加入PI3K/Akt通道抑制劑LY294002前后各組細(xì)胞Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表達(dá)量，并用CCK-8實(shí)驗(yàn)測(cè)定加入抑制劑LY294002后各組細(xì)胞的存活率。
　　結(jié)果：通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示，Na2S204濃度為10mmol/L時(shí)，對(duì)PC12細(xì)胞缺血/再灌注損傷的細(xì)胞存活率在50％左右，與空白組相比具有極顯著性差異（

4、P<0.01），在此種損傷條件下，尼莫地平濃度為5μmol/L時(shí)保護(hù)作用最強(qiáng)；CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，黃芪甲苷預(yù)保護(hù)后能夠提高OGD/R損傷時(shí)細(xì)胞的存活率，且具有一定的濃度梯度差異；Hoechst33342/PI染色實(shí)驗(yàn)中結(jié)果顯示，隨著黃芪甲苷濃度的升高熒光強(qiáng)度逐漸降低；LDH試劑盒實(shí)驗(yàn)顯示，黃芪甲苷預(yù)保護(hù)后加藥組LDH的含量隨藥物濃度的升高而降低；在線粒體膜電位的測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，黃芪甲苷能夠升高OGD/R損傷時(shí)細(xì)胞的膜電位；抗氧化試劑盒結(jié)

5、果顯示，黃芪甲苷預(yù)保護(hù)后能夠提高OGD/R損傷時(shí)細(xì)胞SOD、GSH的含量，降低MDA、ROS的含量；通過(guò)western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在加入PI3K/Akt抑制劑LY294002前，加藥組p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表達(dá)量均隨藥物濃度升高而升高，Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)量隨藥物濃度升高而降低；加入抑制劑后，加藥組p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表達(dá)量均降低，Bax與Caspase-3蛋白表達(dá)量相對(duì)提高。

6、　　結(jié)論：黃芪甲苷在PC12細(xì)胞OGD/R損傷時(shí)能夠提高細(xì)胞的存活率以及線粒體膜電位，降低LDH的漏出量，能夠通過(guò)增加SOD、GSH含量并降低MDA、ROS的含量從而減弱細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的能力，并能夠通過(guò)增加p-Akt/Akt的蛋白含量，進(jìn)而增加Bcl-2的蛋白表達(dá)，降低Bax、Caspase-3的蛋白表達(dá)，因此，黃芪甲苷對(duì)PC12細(xì)胞OGD/R損傷具有保護(hù)作用，并且其保護(hù)作用機(jī)制與抑制氧化應(yīng)激損傷以及PI3K/Akt/Bcl-2信號(hào)通