Thioredoxin-1對OGD-R誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:氧化應(yīng)激是加重腦缺血再灌注損傷的主要因素之一。近年來發(fā)現(xiàn),內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)的上調(diào)對缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞的存活有著至關(guān)重要的作用。Thioredoxin-1(Trx1)作為一種內(nèi)源性的小分子抗氧化蛋白,在神經(jīng)系統(tǒng)中能夠抵御氧化應(yīng)激損傷。然而,其保護(hù)作用及其發(fā)揮作用的機(jī)制尚不清楚。
  目的:探討Trx1對OGD/R誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的抗氧化保護(hù)作用及潛在機(jī)制。
  方法:(1)構(gòu)建四條Trx1 RNAi慢

2、病毒載體(LV3-54, LV3-135, LV3-222, LV3-288)及一條陰性載體LV3-NC,感染傳代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞,在倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和轉(zhuǎn)染效率,用 RT-PCR和Western blot檢測干擾效率,篩選出干擾效果最為顯著的病毒片段。
 ?。?) Trx1基因干擾后,建立星形膠質(zhì)細(xì)胞的氧糖剝奪/復(fù)氧( Oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD)模型,

3、采用MTS/LDH方法檢測細(xì)胞活性及細(xì)胞損傷程度。RT-PCR和Western blot進(jìn)一步測定Trx1以及2-Cys Peroxiredoxin(Prdxs)的基因和蛋白表達(dá)。
 ?。?)體外構(gòu)建 TRE序列突變型熒光素酶報告基因( Trx1(MtTRE)-Luc)和AP-1質(zhì)粒,選擇HEK293細(xì)胞進(jìn)行共轉(zhuǎn)染,利用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測TRE序列突變對于Trx1基因調(diào)控水平變化的影響。
  結(jié)果:(1)慢病毒

4、感染星形膠質(zhì)細(xì)胞后,PT-PCR的結(jié)果顯示,與對照組相比,LV3-288的干擾效率最為顯著(p<0.01)。
  (2)MTS和LDH的結(jié)果顯示,干擾Trx1可以導(dǎo)致OGD/R后星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率的降低及細(xì)胞損傷程度的增加。RT-PCR和Western blot分析顯示,干擾Trx1可以降低2-Cys Prdxs的蛋白表達(dá),而升高Prdx-SO3的表達(dá)。
  (3)雙熒光素酶報告基因的結(jié)果顯示,和AP-1結(jié)合的序列TRE元件

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