可逆性組蛋白乙酰化修飾在人WT1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用及其分子機(jī)制研究.pdf

1、本論文旨在確定可逆的組蛋白乙?；揎検欠駞⑴cWT1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,并試圖探討其分子機(jī)制.通過一系列瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和相對熒光素酶活性分析以及RT-PCR實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶p300/CBP不僅能促進(jìn)WT1啟動子和內(nèi)部增強(qiáng)子的活性,而且能提高內(nèi)源WT1 mRNA的表達(dá)水平.E1A蛋白能抑制p300對WT1報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄激活的促進(jìn)作用,而其突變體E1A delta 2-36因不能與p300/CBP結(jié)合而沒有這種作用,這也間接地證明了p300

2、/CBP能促進(jìn)WT1基因的表達(dá).我們的結(jié)果還表明p300/CBP可分別與轉(zhuǎn)錄因子Sp1、c-Myb和Ets-1協(xié)同地促進(jìn)WT1報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄活性.通過WT1內(nèi)部增強(qiáng)子克隆方向不同的質(zhì)粒,我們證明p300/CBP促進(jìn)WT1報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄激活不受內(nèi)部增強(qiáng)子方向的影響.此外,通過采用HAT區(qū)缺失突變的p300表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),我們證明了p300/CBP的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性在WT1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用.通過染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)(Ch

3、Ip),我們發(fā)現(xiàn)p300/CBP能夠提高WT1內(nèi)部增強(qiáng)子處組蛋白H3的乙?；?另外,我們的結(jié)果表明另一種組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶P/CAF不僅能促進(jìn)WT1報(bào)告基因的表達(dá),而且在此過程中與p300/CBP具有協(xié)同作用.在它們協(xié)同地促進(jìn)WT1報(bào)告基因表達(dá)的過程中,p300/CBP和P/CAF的HAT活性都非常重要.另一方面,我們驗(yàn)證了六種人組蛋白去乙酰化酶(HDAC1-6)對WT1報(bào)告基因表達(dá)水平的影響.結(jié)果表明,HDAC4和HDAC5不僅能抑