肺結(jié)核患者外周血不同T細(xì)胞亞群中免疫記憶性亞型細(xì)胞的分布差異.pdf

1、研究背景：結(jié)核?。═uberculosis, TB）是由于結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）感染引起的慢性傳染病，目前在全球范圍仍然是最常見和最嚴(yán)重的傳染病之一。CD4+T，CD8+T和γδT細(xì)胞在抗MTB感染的免疫過程中起了重要作用。T細(xì)胞分為初始型T細(xì)胞(Tnaive)，中央記憶型 T細(xì)胞(Tcm)，效應(yīng)記憶型 T細(xì)胞(Tem)和效應(yīng)型T細(xì)胞(Teff)。Tcm可以歸巢到次級淋巴組織，產(chǎn)生大

2、量細(xì)胞因子IL-2，少量其他效應(yīng)分子。Tem產(chǎn)生大量效應(yīng)性細(xì)胞因子，發(fā)揮快速的效應(yīng)功能，并進(jìn)入外周組織。Teff則產(chǎn)生效應(yīng)性細(xì)胞因子，并發(fā)揮細(xì)胞毒效應(yīng)。Vγ9Vδ2 T細(xì)胞在人外周血中占大多數(shù)，根據(jù)其表面表達(dá)的分子及效應(yīng)功能，也可分為初始型，記憶型及效應(yīng)型等免疫亞型。但肺TB患者外周血不同T細(xì)胞亞群中免疫記憶性細(xì)胞亞型的數(shù)量有何變化尚少報導(dǎo)。
　　目的：觀察和分析肺TB患者外周血不同T細(xì)胞亞群中免疫記憶性細(xì)胞亞型的變化。
　

3、　方法：
　　1．采集健康成人及肺TB患者外周血，加入熒光標(biāo)記單抗進(jìn)行表面分子染色(anti-CD45RA-FITC， anti-TCRγδ-APC-Vio770， ani-CD4-APC-Vio77， anti-CD27-APC，anti-Vδ1-PE，anti-Vδ2-PerCP，anti-CD8-PE-Cy7，anti-CD3-BV421， anti-CD27-BV510)。通過CD45RA和CD27將不同T細(xì)胞亞群（CD4

4、、CD8、Vδ1、Vδ2和Vδ3-8）中免疫記憶性亞型細(xì)胞分為Tnaive（ CD45RA+CD27+）， Tcm（CD45RA—CD27+），Tem（CD45RA—CD27—）和Teff（CD45RA+CD27—）。流式細(xì)胞儀檢測不同T細(xì)胞亞群中的免疫記憶性亞型細(xì)胞的分布百分率，比較健康成人和肺TB患者之間的差異。
　　2.采集健康成人及肺TB患者外周血，加入佛波醇酯（PMA）和鈣離子霉素（Ionomycin）培養(yǎng)2小時后，再加

5、入莫能霉素（Monensin）繼續(xù)培養(yǎng)4小時，收集細(xì)胞，加入熒光標(biāo)記單抗進(jìn)行表面分子和胞內(nèi)染色（anti-CD45RA-FITC， anti-TCRγδ-APC-Vio770， ani-CD4-APC-Vio77， anti-CD27-APC， anti-Vδ1-PE， anti-Vδ2-PerCP， anti-CD8-PE-Cy7， anti-CD3-BV421， anti-CD27-BV510， anti-IL-17-APC，ant

6、i-IFN-γ-APC）。通過CD45RA和CD27將產(chǎn)IL-17或IFN-γ的不同T細(xì)胞亞群（CD4、CD8、Vδ1、Vδ2和Vδ3-8）中免疫記憶性亞型細(xì)胞分為Tnaive(CD45RA+CD27+)，Tcm(CD45RA—CD27+)， Tem(CD45RA—CD27—)和Teff(CD45RA+CD27—)。流式細(xì)胞儀檢測產(chǎn)IL-17或產(chǎn)IFN-γ的αβT和γδT細(xì)胞亞群中記憶型免疫亞型細(xì)胞的分布比例，比較健康成人和肺TB患者之

7、間的差異。
　　結(jié)果：1.健康成人和肺TB患者外周血中CD4+T細(xì)胞中的Tnaive分別為57.53±13.59和36.49±17.65，（P<0.01）；Tem分別為6.03±3.26和24.44±10.76，（P<0.01）；Teff分別為3.26±4.09和0.75±0.58，（P<0.01）。健康成人和肺TB患者的CD8+T細(xì)胞Tnaive分別為63.33±16.63和24.53±17.58，（P<0.01）；Tem分別為

8、6.56±4.25和39.38±18.31，（ P<0.01）；Teff分別為14.60±11.75和24.83±12.90，(P=0.03)。健康成人和肺TB患者的CD4+和CD8+T細(xì)胞的Tcm之間無統(tǒng)計學(xué)差異，（P>0.05）。
　　2.健康成人與肺TB患者外周血中Vδ1 T細(xì)胞和Vδ3-8 T細(xì)胞（γδTCR+Vδ1—Vδ2— T細(xì)胞）的免疫記憶性亞型細(xì)胞的百分率沒有統(tǒng)計學(xué)差異。健康成人和肺TB患者外周血中Vδ2 T細(xì)胞的

9、Tcm分別為77.90±10.60和61.05±22.98，（P=0.048）；Teff分別為2.00±2.21和5.24±2.30，（P<0.01）；而Tnaive和Tem的百分率兩組人群間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3.健康成人和肺TB患者外周血中產(chǎn)IFN-γ的CD4+T細(xì)胞的Tem的百分率分別為16.22±3.02和27.33±14.34，（P=0.029）；兩組人群中Tnaive、Tcm和Teff的百分率無統(tǒng)計學(xué)差異。健康成人和

10、肺結(jié)核患者外周血中產(chǎn)IFN-γ的CD8+T細(xì)胞的Tcm百分率分別為48.99±13.72和33.66±14.49（P=0.035）；Teff分別為19.57±11.67和42±13.52，(P=0.002)，其余免疫記憶性亞型細(xì)胞的百分率無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　4.健康成人和肺TB患者外周血中產(chǎn)IFN-γ的Vδ1 T細(xì)胞中Tnaive的百分率分別為32.03±19.58和14.86±9.98，（P=0.039）；Teff的百分率分別為

11、42.92±28.48和72.58±18.76，（P=0.022）；兩組人群中其余免疫記憶性亞型細(xì)胞的百分率無統(tǒng)計學(xué)差異。產(chǎn)IFN-γ的Vδ2 T細(xì)胞免疫記憶性亞群細(xì)胞的百分率兩組人群間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。產(chǎn)IFN-γ的Vδ3-8 T細(xì)胞的Tcm的百分率分別為57.51±19.87和36.13±21.43，（P=0.044），其余免疫記憶性亞型細(xì)胞的百分率兩組人群間無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　5.健康成人和肺TB患者外周血中產(chǎn)IL-17的CD

12、4+和CD8+T細(xì)胞的不同免疫記憶性亞型細(xì)胞的百分率之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.肺TB患者外周血中αβT和γδT細(xì)胞的CD4+T，CD8+T以及Vδ2 T亞群的免疫記憶性亞型細(xì)胞的分布發(fā)生改變。此外，肺TB患者外周血產(chǎn)IFN-γ的αβT和γδT細(xì)胞亞群，除Vδ1，Vδ3-8亞群免疫記憶性亞型細(xì)胞的分布也發(fā)生改變。這一變化可能與機體抗Mtb感染的免疫應(yīng)答有關(guān)，且其改變可能具有保護(hù)作用。
　　2.肺TB患者外