炭疽桿菌毒力大質(zhì)粒的驅(qū)除及比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、炭疽芽孢桿菌引發(fā)的炭疽病是一種烈性的人畜共患的傳染病,危害性極強(qiáng)。尤其近些年,國(guó)際上一些恐怖分子利用炭菌桿菌的芽孢制造的恐怖事件,嚴(yán)重干擾了人們的日常生活及社會(huì)經(jīng)濟(jì)秩序。因此,對(duì)其進(jìn)行研究具有一定的理論價(jià)值和潛在的社會(huì)效益。
　　 在本研究中,運(yùn)用質(zhì)粒不相容性原理,分別以炭疽桿菌A16R與A16作為實(shí)驗(yàn)的出發(fā)菌株,構(gòu)建了pXO1質(zhì)粒缺失突變株A16RPI1和pXO2質(zhì)粒缺失突變株A16PI2。對(duì)菌株A16RPI1與A16RP及A

2、16PI2與A16R在生長(zhǎng)趨勢(shì)、糖代謝等方面進(jìn)行了比較,并鑒定了A16PI2的莢膜生成能力;分別制備了A16RPI1與A16RP的23 h的全菌蛋白質(zhì)樣品和A16PI2與A16R的20 h的全菌蛋白質(zhì)樣品,通過(guò)pH4-7梯度的雙向電泳找出差異蛋白,并對(duì)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行了質(zhì)譜檢測(cè)分析。得到了以下主要結(jié)果:
　　 1)菌株A16RPI1與菌株A16RP的生長(zhǎng)趨勢(shì)基本一致,且二者的糖代謝也無(wú)區(qū)別。
　　 2)菌株A16PI2與菌

3、株A16R的生長(zhǎng)趨勢(shì)也是一致的,但二者的糖代謝情況稍有不同,A16PI2可以代謝果糖但是A16R卻不能代謝果糖。經(jīng)過(guò)莢膜培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,A16PI2確實(shí)不能生成莢膜。
　　 3)菌株A16RPI1與菌株A16RP穩(wěn)定期蛋白質(zhì)在pH4-7這一梯度有5個(gè)差異蛋白,這些蛋白都定位在細(xì)胞質(zhì)中,主要是翻譯過(guò)程中的延伸因子和與氨基酸代謝相關(guān)的酶。
　　 4)菌株A16PI2與菌株A16R穩(wěn)定期蛋白質(zhì)在pH4-7這一梯度有22個(gè)差異蛋白