高靈敏核酸擴(kuò)增技術(shù)在生物傳感中的應(yīng)用.pdf

1、小分子-蛋白質(zhì)的相互作用、拷貝數(shù)變異與人類生產(chǎn)生活密切相關(guān),因而一直是重要的分析研究對(duì)象。蛋白質(zhì)是生物化學(xué)與生命科學(xué)中重要的生物大分子,是生物性狀的直接表達(dá)者,從整體上維持生物體新陳代謝活動(dòng)的進(jìn)行,擔(dān)負(fù)著各種生理功能,深入研究小分子物質(zhì)與蛋白質(zhì)的作用機(jī)理,對(duì)分子水平上闡明生命的奧秘等方面具有重要的意義。而基因拷貝數(shù)變異是研究基因組進(jìn)化和表型差異的一個(gè)重要方面,被認(rèn)為是個(gè)體之間在基因組序列差異上的一個(gè)重要原因。許多研究結(jié)果表明,拷貝數(shù)變異

2、可導(dǎo)致不同程度的基因表達(dá)差異,與正常表型的構(gòu)成及疾病的發(fā)生發(fā)展具有一定的聯(lián)系。因此,建立小分子-蛋白質(zhì)相互作用及拷貝數(shù)變異快速、簡(jiǎn)便的分析方法具有重要的生物學(xué)意義。核酸擴(kuò)增由于具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、省時(shí)省力等諸多優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物傳感器的研究。
　　 本文研究了幾種檢測(cè)小分子-蛋白質(zhì)相互作用以及拷貝數(shù)變異的核酸擴(kuò)增檢測(cè)方法：⑴結(jié)合T7聚合酶與一個(gè)小分子標(biāo)記的DNA雙鏈,發(fā)展了一種RNA轉(zhuǎn)錄器件。當(dāng)小分子與其蛋白質(zhì)受體結(jié)合時(shí)

3、,該納米器件的RNA轉(zhuǎn)錄活性受到抑制,進(jìn)而影響熒光信號(hào)的產(chǎn)生?；谶@種原理,我們發(fā)展了一種新型的均相無標(biāo)記檢測(cè)策略用于檢測(cè)小分子及其蛋白質(zhì)受體的相互作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該實(shí)驗(yàn)方法對(duì)蛋白質(zhì)從0.5 nM至64nM有良好的動(dòng)態(tài)響應(yīng),檢測(cè)下限為0.2 nM。此外,我們還使用了三種小分子化合物及其蛋白質(zhì)受體驗(yàn)證了該實(shí)驗(yàn)方法的通用檢測(cè)性能。⑵基于巢式多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng),使用α-珠蛋白基因作為模型系統(tǒng),對(duì)基因組序列的給定區(qū)域內(nèi)的拷貝數(shù)進(jìn)行同