SD大鼠下丘的蛋白提取和分析.pdf

1、目的:
　　研究聽覺(jué)傳導(dǎo)通路中下丘(Inferior colliculus，IC)的蛋白質(zhì)表達(dá)情況，找出下丘區(qū)域特異性蛋白，并進(jìn)一步分析其基因組成，以及各基因間的相互關(guān)系，從而探索IC在中樞聽覺(jué)信息整合及處理中的作用及機(jī)制，為進(jìn)一步研究中樞聽覺(jué)處理障礙（Central auditory processingdi sorders，CAPD）的發(fā)病機(jī)制提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　對(duì)出生后60天體重230g左右的雄

2、性SD大鼠的IC、耳蝸核(CochlearNucleus，CN)、上橄欖核復(fù)合體(Superior Oliver Complex，SOC)、端腦包括大腦皮層和小腦（Rest）這四個(gè)區(qū)域細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行研究。(1)細(xì)胞質(zhì)蛋白采用熒光差異雙向電泳技術(shù)(Two dimension difference gelelectrophoresis，2D-DIGE)進(jìn)行分離。(2)細(xì)胞膜蛋白采用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(isobarict

3、agsfor relative and absolute quantitation，iTRAQ)的方法進(jìn)行鑒定。采用質(zhì)譜分析對(duì)各蛋白點(diǎn)進(jìn)行定性定量分析，找出IC區(qū)域特異性蛋白，再對(duì)其進(jìn)行基因本體(Gene Ontology，GO)分析、京都基因與基因組百科全書(KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)通路分析以及蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction，PPI

4、)分析，探索這些區(qū)域特異性蛋白的功能以及其在各通路中所起的作用，篩選出聽覺(jué)處理障礙相關(guān)的目標(biāo)蛋白。
　　結(jié)果:
　　本實(shí)驗(yàn)最終通過(guò)2-D DIGE方法供檢測(cè)出4種IC區(qū)域特異性細(xì)胞質(zhì)蛋白，通過(guò)iTRAQ的方法共檢測(cè)出53種IC區(qū)域特異性膜蛋白。通過(guò)對(duì)這些蛋白進(jìn)行GO分析發(fā)現(xiàn)IC區(qū)域特異性蛋白主要起到了轉(zhuǎn)運(yùn)及蛋白定位，進(jìn)而調(diào)節(jié)神經(jīng)元生長(zhǎng)發(fā)育以及信息整合的作用。通過(guò)KEGG通路分析的方法對(duì)這些區(qū)域特異性蛋白所參與的通路進(jìn)行分析，

5、可以看出其主要參與氧化磷酸化(Oxidativephosphorylation)，興奮性突觸（Glutamatergic synapse）、抑制性突觸(GABAergicsynapse)。通過(guò)蛋白質(zhì)相互作用分析，發(fā)現(xiàn)CaMK2D，SV2A這兩種蛋白主要起到調(diào)節(jié)興奮性、抑制性神經(jīng)遞質(zhì)傳導(dǎo)及釋放功能。
　　結(jié)論:
　　(1) IC區(qū)域特異性蛋白主要參與興奮性突觸、抑制性突觸，維持興奮性-抑制性神經(jīng)遞質(zhì)平衡可能是IC進(jìn)行聽覺(jué)處理、