SD大鼠下丘的蛋白提取和分析.pdf

1、目的:
　　研究聽覺傳導通路中下丘(Inferior colliculus，IC)的蛋白質表達情況，找出下丘區(qū)域特異性蛋白，并進一步分析其基因組成，以及各基因間的相互關系，從而探索IC在中樞聽覺信息整合及處理中的作用及機制，為進一步研究中樞聽覺處理障礙（Central auditory processingdi sorders，CAPD）的發(fā)病機制提供一定的理論基礎。
　　方法:
　　對出生后60天體重230g左右的雄

2、性SD大鼠的IC、耳蝸核(CochlearNucleus，CN)、上橄欖核復合體(Superior Oliver Complex，SOC)、端腦包括大腦皮層和小腦（Rest）這四個區(qū)域細胞質和細胞膜的蛋白質組學進行研究。(1)細胞質蛋白采用熒光差異雙向電泳技術(Two dimension difference gelelectrophoresis，2D-DIGE)進行分離。(2)細胞膜蛋白采用同位素標記相對和絕對定量(isobarict

3、agsfor relative and absolute quantitation，iTRAQ)的方法進行鑒定。采用質譜分析對各蛋白點進行定性定量分析，找出IC區(qū)域特異性蛋白，再對其進行基因本體(Gene Ontology，GO)分析、京都基因與基因組百科全書(KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)通路分析以及蛋白質相互作用(protein-protein interaction，PPI

4、)分析，探索這些區(qū)域特異性蛋白的功能以及其在各通路中所起的作用，篩選出聽覺處理障礙相關的目標蛋白。
　　結果:
　　本實驗最終通過2-D DIGE方法供檢測出4種IC區(qū)域特異性細胞質蛋白，通過iTRAQ的方法共檢測出53種IC區(qū)域特異性膜蛋白。通過對這些蛋白進行GO分析發(fā)現IC區(qū)域特異性蛋白主要起到了轉運及蛋白定位，進而調節(jié)神經元生長發(fā)育以及信息整合的作用。通過KEGG通路分析的方法對這些區(qū)域特異性蛋白所參與的通路進行分析，

5、可以看出其主要參與氧化磷酸化(Oxidativephosphorylation)，興奮性突觸（Glutamatergic synapse）、抑制性突觸(GABAergicsynapse)。通過蛋白質相互作用分析，發(fā)現CaMK2D，SV2A這兩種蛋白主要起到調節(jié)興奮性、抑制性神經遞質傳導及釋放功能。
　　結論:
　　(1) IC區(qū)域特異性蛋白主要參與興奮性突觸、抑制性突觸，維持興奮性-抑制性神經遞質平衡可能是IC進行聽覺處理、