大鼠下丘神經(jīng)元上酸敏感離子通道功能特性的研究.pdf

1、酸敏感離子通道是可被胞外的H<'+>直接激活的配體門控的陽離子通道，在哺乳動物的中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)中都有廣泛的分布。越來越多的證據(jù)表明，ASICs在生理及病理的條件下都發(fā)揮了重要的功能。在生理條件下，ASICs參與了味覺、嗅覺和視覺的感受：在病理條件下，ASICs在痛覺、癲癇及缺血造成的損傷中扮演了重要的角色。而對于ASICs在聽覺通路上的表達及功能研究得不多，僅有的幾篇文獻主要是研究ASICs在外周的聽覺通路上的表達及功能特性。在聽覺

2、中樞上ASICs的表達、通道特性及其生理功能目前還不清楚。因此，本研究用RT-PCR、全細胞膜片鉗及鈣成像等方法，研究了下丘ASICs的表達以及下丘神經(jīng)元上酸誘導(dǎo)電流的電生理學(xué)和藥理學(xué)特性，鑒定了介導(dǎo)該電流的ASICs的亞基組成，主要結(jié)果如下： 1.RT-PCR的結(jié)果顯示在下丘可檢測到ASIC1a，ASIC1b，ASIC2a，ASIC2b四種亞基的表達，而ASIC3亞基在下丘上不表達。 2.細胞外環(huán)境的pH值的下降可

3、在培養(yǎng)的下丘神經(jīng)元上誘導(dǎo)出快速失活的內(nèi)向電流：該電流對胞外pH高度敏感，激活閾值約為pH 6.9，半效激活pH為5.92；ASICs通道非選擇性拮抗劑amiloride可以阻斷下丘神經(jīng)元上酸誘導(dǎo)的電流(IC<,50>=20.4±0.4μM)：該電流的反轉(zhuǎn)電位接近Na<'+>的反轉(zhuǎn)電位，且用NMDG取代Na<'+>極大的抑制了該電流。這些結(jié)果提示酸在下丘神經(jīng)元上誘導(dǎo)的電流是由ASICs介導(dǎo)的。 3.更進一步的證據(jù)表明，ASIC1

4、a同聚體通道參與介導(dǎo)酸在下丘神經(jīng)元上介導(dǎo)的電流：(1)經(jīng)典的離子替換及鈣成像的結(jié)果顯示，介導(dǎo)下丘神經(jīng)元上酸誘導(dǎo)電流的通道可以通透Ca<'2+>；(2)PcTX1(ASIC1a同聚體通道的選擇性拮抗劑)對下丘神經(jīng)元上酸誘導(dǎo)的電流有明顯的抑制作用；(3)胞外的Ca<'2+>及pb<'2+>可以顯著的抑制該電流，進一步驗證了ASIC1a亞基的存在。此外，Zn<'2+>(300 μM)可以增強該電流的幅度，提示ASIC2a亞基的存在。而水楊酸鈉