豬和大鼠胃腸道FoxO蛋白表達(dá)分析.pdf

1、Forkhead box(Fox)蛋白調(diào)控著細(xì)胞的分化、增殖、免疫和衰老。大多數(shù)與Fox蛋白相關(guān)的研究都局限在培養(yǎng)的細(xì)胞和嚙齒動(dòng)物中。本實(shí)驗(yàn)利用免疫組織化學(xué)，免疫熒光，Western-blot，放射免疫測(cè)定技術(shù)等方法檢測(cè)豬和大鼠胃腸道是否存在Fox01、Fox03a和Fox04蛋白的表達(dá)以及其變化規(guī)律。 1．Fox0蛋白在豬胃腸道的定位 本實(shí)驗(yàn)對(duì)4頭杜長(zhǎng)大三元雜交成年豬采用常規(guī)免疫組化的方法檢測(cè)豬胃腸道各部位Fox0家族

2、成員的定位。實(shí)驗(yàn)就Fox0蛋白在胃底部、幽門部、無腺部、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、盲腸、直腸定位進(jìn)行了具體分析。結(jié)果表明：Fox04存在于胃和腸各部的黏膜層，F(xiàn)ox03a主要存在與各部的固有層和肌層，然而Fox01在胃腸各部都沒檢測(cè)到。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示，豬胃腸道中Fox蛋白的表達(dá)有其固定的模式，而Fox04是成年豬胃腸道中分布的主要forkhead轉(zhuǎn)錄因子。這些結(jié)果提示Fox0蛋白在豬胃腸道組織和細(xì)胞中呈特異性表達(dá)。 2．豬腸

3、道Fox04依賴年齡性的定位 基于以上實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Fox04是成年豬胃腸道主要的forkhead box轉(zhuǎn)錄因子，本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步探測(cè)Fox04蛋白隨豬發(fā)育程度在腸道內(nèi)的變化規(guī)律，將Od(新生)，30d(斷奶一周)，160d(性成熟階段)，180d(成年階段)杜長(zhǎng)大三元雜交母豬作為研究對(duì)象，再次通過免疫組織化學(xué)研究Fox04蛋白在不同年齡階段(不同發(fā)育階段)的腸道內(nèi)的表達(dá)情況。 3．大鼠胃腸道Fox04蛋白年齡依賴性的表達(dá)

4、 為了驗(yàn)證Fox04蛋白在其他哺乳動(dòng)物胃腸道內(nèi)也表現(xiàn)年齡依賴的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)采用了嚙齒類動(dòng)物大鼠為模型進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)以21d(斷奶)，2月(性成熟)，6月(青年)，SD大鼠的十二指腸為研究研究對(duì)象，利用免疫組化，免疫熒光以及Western-blot檢測(cè)不同年齡大鼠胃腸道Fox04的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠十二指腸Fox04蛋白的表達(dá)有年齡依賴特異性，定位特異性和組織特異性，為研究Fox04在動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育過程中的表達(dá)變化規(guī)律以及進(jìn)一步探討