維生素C后處理對離體大鼠心臟缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：心肌缺血再灌注損傷會引起心肌頓抑、心律失常、舒縮功能障礙等多種心臟不良事件的發(fā)生。維生素 C是一種弱酸性維生素，具有強大的抗氧化作用，以往研究發(fā)現(xiàn)，VC能夠清除氧自由基、抑制細胞膜脂質過氧化、減輕心肌超微結構的損傷，但其是否對離體大鼠心臟缺血再灌注損傷有保護作用及發(fā)揮保護作用的具體機制尚不清楚。本研究觀察維生素 C后處理對離體大鼠心臟缺血再灌注損傷是否有保護作用，同時設立與其PH值相同的HCl對照組，探討其發(fā)揮作用的相關機制。

2、r>　　方法：健康雄性SD大鼠40只，體重230-280g，隨機分為4組，每組10只：對照組（Control組）、缺血再灌注組（I/R組）、維生素C后處理組（VC組）、鹽酸后處理組（HCl組）（PH值與VC組相同，均為5.80）。Control組連續(xù)灌流140min。I/R組平衡灌流20min，全心缺血30min，再灌注90min。VC組、HCl組在再灌注開始前分別給與濃度為10mM的VC溶液及與VC溶液相同PH值的HCl溶液推注，然后

3、繼續(xù)灌注90min。
　　采用Langendorff離體心臟灌流裝置進行模型制備，記錄各時間點的心功能指標，包括心率（HR）、左心室舒張末壓（LVEDP）、左心室收縮壓（LVSP）、左心室壓力最大變化速率（±dp/dtmax）。收集平衡灌流20min末、復灌1min、3min、5min、10min、30min、60min、90min各時間點灌流液測定乳酸脫氫酶（LDH）活性。復灌結束后，取下心臟，用TTC染色法檢測心肌梗死面積，冷

4、凍切片后行 HE染色觀察細胞形態(tài)， Western Blot檢測相關蛋白的表達。采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件進行單因素方差（ANOVA）分析，以 P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.血流動力學指標的變化:平衡期末各組血流動力學指標變化無統(tǒng)計學差異，而在缺血再灌注不同時間點大鼠心臟血流動力學指標變化各有不同。I/R組、VC組、HCL組經(jīng)缺血30min再灌后，在再灌注早期，±dp/dtmax與相應對照組相比明

5、顯降低，而LVEDP則升高明顯。VC組各項指標優(yōu)于I/R組，HCl組較I/R比較雖然各項指標有所改善，但是差異不顯著；
　　2.各組心肌梗死面積的比較:與I/R組（37.92％±1.77%）相比，VC組（18.24%±1.67%）與HCl（21.58%±1.20%）心肌梗死面積顯著減少，而VC組效果明顯優(yōu)于HCl組；
　　3.冠脈流出液中LDH活性的變化:平衡期末各組冠脈流出液中 LDH含量變化沒有統(tǒng)計學差異。再灌注期間，I

6、/R組、VC組和HCL組LDH活性均呈不同程度升高，再灌注3min時達到峰值，之后逐漸下降，90min時I/R組（171.87±47.75 U/L）與HCl組（133.13±36.73U/L）LDH的含量較control組（30.02±13.13 U/L）仍顯著升高，而VC組（61.87±30.59U/L）與I/R組比較， LDH含量明顯降低；
　　4.各組心肌組織HE染色結果:control組心肌細胞排列整齊，邊界清楚，無炎性浸

7、潤。I/R組心肌細胞排列紊亂，出現(xiàn)不同程度細胞腫脹、壞死、溶解現(xiàn)象，心肌纖維斷裂，肌間隙明顯增寬，大量中性粒細胞浸潤。VC組心肌細胞排列不規(guī)則，部分細胞出現(xiàn)腫脹、溶解、碎裂現(xiàn)象，肌間隙略增寬，少量中性粒細胞浸潤。HCL組心肌纖維排列不規(guī)則，細胞腫脹，可見細胞溶解、碎裂，肌間隙增寬，中性粒細胞浸潤。表明維生素 C可以明顯減輕缺血再灌注對心肌細胞的損傷；
　　5.各組心肌組織中 cyto-C、Bax、BCl-2、Caspase-9、P

8、-ERK、ERK蛋白表達量的比較:與control組相比，I/R組、VC組、HCL組中cyto-C、Bax、Caspase-9、P-ERK表達明顯增多，VC組及HCl組中BCl-2的表達明顯增多，提示心肌再灌注后，線粒體損傷，凋亡途徑激活，ERK信號通路活化；與I/R組相比，相同PH值的VC組及HCl組中cyto-C、Bax、Caspase-9、P-ERK的表達均明顯減少，BCl-2表達明顯增加，提示VC及相同PH值的HCl組可通過下調