姜黃素類似物L6H4對2型糖尿病大鼠睪丸抗氧化及抗凋亡的作用.pdf

1、目的：
　　觀察姜黃素類似物L6H4對高脂飲食及2型糖尿病大鼠睪丸氧化應激指標的影響，及其對睪丸生精細胞增殖細胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、BAX和BCL-2表達的影響。探討姜黃素類似物L6H4對高脂飲食及2型糖尿病大鼠睪丸抗氧化和抗凋亡作用可能的機制。
　　方法：
　　雄性SD大鼠60只，隨機分為正常組（normal control group，NC，n=

2、8）、高脂實驗組(n=20)和糖尿病實驗組(n=32)。后兩實驗組均喂以高脂飼料。4周后，糖尿病實驗組禁食12小時，再腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)30mg/Kg復制2型糖尿病模型。造模成功標準:72小時后的尾靜脈空腹血糖(fasting blood-glucose，F(xiàn)BG)FBG≥16.7mmol/L，一周后復測，F(xiàn)BG≥16.7mmol/L。造模達標的大鼠，再隨機分為糖尿病組(diabeticmellit

3、us group，DM，n=10)和糖尿病治療組(diabetic treatment group，DT，n=14)，高脂實驗組隨機分為高脂組(high fat group，HF，n=8)和高脂治療組(high fat treatment group，F(xiàn)T，n=12)。FT組和DT組均以0.2mg/Kg的劑量灌胃注射姜黃素類似物L6H4（L6H4溶于1％羧甲基纖維素鈉中）8周，每天一次;而NC組、HF組和DM組則用等量的羧甲基纖維素鈉(

4、CMCNa)進行灌胃對照治療，每天一次。實驗結束時，禁食12h腹腔注射10％水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉后處死大鼠。收集血清及睪丸標本，觀察各組大鼠體重及睪丸重量;檢測空腹血糖、胰島素水平(fasting insulin，F(xiàn)INs)，計算胰島抵抗指數(shù)(HOMA-IR);光學顯微鏡下觀察睪丸生精小管的形態(tài)變化;使用TUNEL試劑盒檢測各組大鼠睪丸生精細胞的凋亡變化;免疫組織化學法檢測各組大鼠睪丸生精細胞的增殖細胞核抗原(proli

5、ferating cell nuclear antigen，PCNA)表達的情況;檢測各組大鼠睪丸組織氧化應激指標SOD、MDA的變化;Western Blot法檢測各組大鼠睪丸PCNA、BAX、BCL-2表達的水平及BAX/BCL-2比值的變化。
　　結果：
　　1.各組大鼠體重及睪丸重量的變化:
　　HF組大鼠體重較NC組明顯增加(P＜0.05)，而DM組大鼠體重較NC組明顯下降(P＜0.05);DM組大鼠睪丸重量

6、較NC組明顯減輕(P＜0.05)。
　　2.血糖、胰島素及胰島抵抗指數(shù)水平
　　與NC組相比，DM組的FBG、FINs、HOMA-IR均明顯升高(P＜0.01);DT組較DM組的FBG、FINs、HOMA-IR均明顯降低(P＜0.01)。HF組較NC組FBG、HOMA-IR均明顯升高(P＜0.01);FT組較HF組的FBG、HOMA-IR均明顯降低(P＜0.01)。
　　3.大鼠睪丸光鏡下組織病理學變化
　　與N

7、C組相比，HF組睪丸生精小管變形，各級生精細胞層次減少、排列紊亂，在靠近生精小管基膜的部位可見長型成熟精子滯留。FT組睪丸的組織結構較HF組有明顯改善，精子滯留現(xiàn)象緩解。DM組睪丸的鏡下組織結構破壞嚴重，生精小管上皮變薄，基膜部分不連續(xù)，管內(nèi)生精細胞脫落嚴重。各級生精細胞變小、層次減少、精子減少。而DT組睪丸的上述組織結構較DM組有明顯改善。
　　4.各組大鼠睪丸PCNA表達的情況
　　與NC組相比，DM組精原細胞的PCNA

8、表達減弱，DT組精原細胞的PCNA表達較DM組明顯增加。同時Western blot結果顯示DM組PCNA較NC組明顯減少(P＜0.01)，且DT組PCNA較DM組顯著增加(P＜0.01)。
　　5.各組大鼠睪丸氧化應激指標MDA、SOD的情況
　　與NC組相比，HF組和DM組大鼠SOD水平均顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)、MDA水平均顯著增高（P＜0.05，P＜0.01）;與DM組大鼠相比，DT組SOD活性顯著增高

9、（P＜0.05），MDA水平顯著下降(P＜0.05)。
　　6.各組大鼠睪丸細胞凋亡的情況
　　NC組生精小管內(nèi)僅見個別凋亡細胞。HF組和DM組大鼠睪丸細胞凋亡指數(shù)較NC組均顯著升高(P＜0.01，P＜0.01);DT組凋亡指數(shù)較DM組顯著降低(P＜0.01)，而FT組凋亡指數(shù)較HF組無顯著差異(P＞0.05)。
　　7.各組大鼠睪丸BAX、BCL-2、BAX/BCL-2的變化
　　DM組BAX、BAX/BCL-

10、2較NC組顯著增加(P＜0.01)，BCL-2較NC組顯著減少(P＜0.01);HF組BAX、BAX/BCL-2較NC組也顯著增多(P＜0.05，P＜0.01)，Bcl-2較NC組顯著減少（P＜0.01）。DT組BAX、BAX/BCL-2較DM組顯著減少(P＜0.01)，BCL-2較DM組顯著增加(P＜0.05);而FT組BAX、BCL-2、BAX/BCL-2水平較HF組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　結論：
　　1.高