姜黃素及其類似物L(fēng)3的抗氧化活性和對(duì)小鼠糖尿病模型及血管并發(fā)癥影響的研究.pdf

1、本文對(duì)姜黃素及其類似物L(fēng)3的抗氧化活性和對(duì)小鼠糖尿病模型及血管并發(fā)癥影響進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：姜黃素及其類似物L(fēng)3對(duì)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的作用。
　　 目的：研究姜黃素及其類似物L(fēng)3對(duì)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的作用，并探討其可能的調(diào)節(jié)作用機(jī)制。
　　 方法：以過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)HUVEC損傷，體外模擬自由基損傷模型。采用MTT法以細(xì)胞存活率為指標(biāo)評(píng)價(jià)姜黃素

2、及其類似物L(fēng)3對(duì)氧化損傷的HUVEC的保護(hù)作用。測定H2O2損傷HUVEC后細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)和過氧化氫酶(CAT)活性和還原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量的變化。DCF-DA熒光試劑法檢測胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量。DAF-FM DA熒光試劑法檢測胞內(nèi)一氧化氮(NO)的含量，硝酸還原酶法檢測胞外NO的含量。Western blotting檢測內(nèi)皮

3、細(xì)胞一氧化氮合酶eNOS的表達(dá)。分光光度法檢測Caspase3和Caspase9的活性，Western blotting檢測其蛋白表達(dá)。羅丹明123熒光試劑法檢測線粒體膜電位。Western blotting檢測ERK1/2磷酸化、NF-κB核轉(zhuǎn)位及p53蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：200μM H2O2作用36 h，細(xì)胞存活率顯著降低。H2O2誘導(dǎo)產(chǎn)生顯著的細(xì)胞凋亡特征，包括線粒體去極化及Caspase3和Caspase9的活性和蛋

4、白表達(dá)顯著增加。另外，H2O2還誘導(dǎo)丙二醛(MDA)含量增加、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性和胞內(nèi)活性氧(ROS)產(chǎn)生增強(qiáng)，誘導(dǎo)還原型谷胱甘肽(GSH)和胞內(nèi)/胞外一氧化氮(NO)含量降低，細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)和過氧化氫酶(CAT)活性降低及內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶eNOS表達(dá)減少。12.5-50μM L3與H2O2損傷的HUVEC共孵育，細(xì)胞存活率顯著增加，具有濃度依賴性；而12.5-25μ

5、M姜黃素對(duì)H2O2損傷的HUVEC無保護(hù)作用。L3可以抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，減輕H2O2誘導(dǎo)的其它損傷，且具有濃度依賴性。L3還可以抑制H2O2誘導(dǎo)的p53和NF-κB活化，促進(jìn)ERK1/2磷酸化。
　　 結(jié)論：姜黃素類似物L(fēng)3可以濃度依賴性地減輕H2O2誘導(dǎo)的HUVEC損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。其保護(hù)作用機(jī)制可能與減少ROS生成，增強(qiáng)抗氧化酶活性，改善細(xì)胞氧化/抗氧化狀態(tài)，提高內(nèi)皮細(xì)胞eNOS的表達(dá)，激活內(nèi)皮細(xì)胞NO的合成

6、，維持線粒體膜電位，抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。
　　 第二部分：姜黃素及其類似物L(fēng)3對(duì)鏈脲菌素(STZ)+高脂飼料誘導(dǎo)的高脂血癥糖尿病小鼠的作用。
　　 目的：研究姜黃素及其類似物L(fēng)3對(duì)鏈脲菌素(STZ)+高脂飼料誘導(dǎo)的高脂血癥糖尿病小鼠的作用，并探討其對(duì)糖尿病小鼠相關(guān)器官損傷的保護(hù)作用。
　　 方法：雄性ICR小鼠以隔天一次腹腔注射50 mg/kg體重STZ溶液共五次誘導(dǎo)糖尿病模型，隨后飼以高脂飼料，并分別給予不同劑量

7、的姜黃素或L3進(jìn)行干預(yù)。各組小鼠分別在給藥4周后和給藥16周后處死，測定小鼠血糖、糖耐量、糖化血紅蛋白、胰島素、血脂、肝脂、肝臟GSH和MDA含量，SOD、GST、GSH-PX和CAT活性。DCF-DA熒光試劑法檢測胰腺ROS的含量。DAF-FM DA熒光試劑法檢測主動(dòng)脈弓NO的含量，硝酸還原酶法檢測血漿NO的含量。免疫組化檢測主動(dòng)脈弓LOX-1的表達(dá)。肝臟和主動(dòng)脈弓組織切片行病理檢查。
　　 結(jié)果：腹腔注射STZ溶液五次后成功

8、誘導(dǎo)小鼠糖尿病模型。飼以高脂飼料4周后和16周后，小鼠血脂、肝脂顯著升高。各種氧化應(yīng)激參數(shù)和抗氧化酶活性發(fā)生明顯變化。胰腺ROS生成顯著增加。血漿和主動(dòng)脈弓NO含量顯著降低。主動(dòng)脈弓LOX-1表達(dá)顯著升高。肝臟和主動(dòng)脈弓發(fā)生明顯的脂肪變性和動(dòng)脈粥樣硬化變性。姜黃素高劑量組和L3中、高劑量組小鼠糖、脂代謝明顯改善，氧化應(yīng)激參數(shù)和抗氧化酶活性也明顯改善。胰腺ROS生成顯著減弱。血漿和主動(dòng)脈弓NO含量顯著增加。主動(dòng)脈弓LOX-1表達(dá)顯著降低。