EGb761對(duì)大鼠心梗后透明質(zhì)酸水平和心肌纖維化的影響.pdf

1、目的：心肌梗死是最嚴(yán)重的心血管疾病之一，發(fā)病率、致死率和致殘率高。心肌纖維化（myocardial fibrosis,MF）是心梗后發(fā)生的重要病理生理改變，可導(dǎo)致心室功能減退，最終發(fā)生惡性心律失常、心力衰竭甚至猝死，其嚴(yán)重程度和疾病的發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。目前MF治療的西藥研究主要集中在血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑、醛固酮受體拮抗劑和鈣拮抗劑等。但目前尚無療效確切、毒副作用小的藥物。所以，心梗后MF的治療是臨床上亟待解決的

2、問題。
　　銀杏葉提取物是從銀杏葉中提取的活性物質(zhì)，主要成分為銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯類化合物。銀杏葉提取物是臨床上使用最為廣泛的中藥提取物之一，在130多個(gè)國家作為藥物或食品添加劑被廣泛應(yīng)用。目前國際上標(biāo)準(zhǔn)的銀杏葉提取物是按德國專利生產(chǎn)的金納多（EGb761），有24％的銀杏黃酮和6%的銀杏內(nèi)酯等，而有害物質(zhì)銀杏酸小于5μg/g。大量實(shí)驗(yàn)表明銀杏葉提取物EGb761不僅有廣泛的藥理活性，還具有毒副作用低、安全劑量寬的優(yōu)點(diǎn)。
　　

3、研究表明銀杏葉提取物可明顯抑制肝、腎和肺臟的纖維化。如在肝纖維化大鼠，銀杏葉提取物EGb761可抑制肝星狀細(xì)胞活化，減少膠原生成。在肺纖維化大鼠EGb761能使肺組織中羥脯氨酸含量降低。在腎纖維化大鼠，銀杏葉提取物通過調(diào)節(jié)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2的表達(dá)起到治療作用。我研究室在細(xì)胞培養(yǎng)水平初步發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物EGb761可明顯抑制醛固酮誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化，提示銀杏葉提取物有可能改善MF的發(fā)生和發(fā)展。但在整體動(dòng)物模型銀杏葉提取物EG

4、b761是否對(duì)心梗后MF有防治作用，尚有待于進(jìn)一步證實(shí)。
　　Masson染色是利用蘇木素、酸性品紅和苯胺藍(lán)，對(duì)膠原纖維和結(jié)締組織等進(jìn)行染色。染色效果好，易于辨識(shí)，對(duì)評(píng)價(jià)MF有優(yōu)勢(shì)。透明質(zhì)酸（hyaluronic acid,HA）大量存在于動(dòng)物細(xì)胞外基質(zhì)、結(jié)締組織和器官中，其化學(xué)本質(zhì)是糖胺聚糖，纖維化過程中HA分泌增多，釋放進(jìn)入血液循環(huán)。研究表明，血中HA是反映MF程度的無創(chuàng)指標(biāo)，可作為觀察抗MF藥物療效和預(yù)后監(jiān)測(cè)的重要依據(jù)。

5、r>　　因此，本實(shí)驗(yàn)在大鼠心梗后MF模型中應(yīng)用三種不同劑量的銀杏葉提取物EGb761，觀察血中HA的變化和Masson染色反映的MF程度，以探討銀杏葉提取物對(duì)心梗后MF的防治作用，為臨床上心梗后MF的防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：健康雄性Sprague Dawley（SD）大鼠，體重260±20g，來自于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，隨機(jī)分為以下5組：
　　1.假手術(shù)組（n=5）：在冠狀動(dòng)脈左前降支的相同部位穿線，但不結(jié)扎，其

6、余與模型組相同。
　　2.模型組（n=8）：結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，并于術(shù)后給予生理鹽水。
　　3.模型+銀杏葉提取物EGb761（25mg/kg）組（n=5）：結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，并于術(shù)后給予銀杏葉提取物EGb76125mg/kg/d。
　　4.模型+銀杏葉提取物EGb761（50mg/kg）組（n=5）：結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，并于術(shù)后給予銀杏葉提取物EGb76150mg/kg/d。
　　5.模型+銀杏葉提取物

7、EGb761（100mg/kg）組（n=5）：結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，并于術(shù)后給予銀杏葉提取物EGb761100mg/kg/d。
　　若有動(dòng)物術(shù)中或術(shù)后死亡，即另加動(dòng)物補(bǔ)齊。
　　3只模型組大鼠術(shù)后4周取材，TTC染色評(píng)價(jià)模型成功情況。各組5只大鼠術(shù)后4周取材，放射免疫法分析血中HA的變化，以及心肌組織Masson染色觀察心梗后MF的程度。
　　結(jié)果：
　　1.大體觀察心臟外形和TTC染色結(jié)果
　　心梗后MF

8、模型大鼠在術(shù)后4周處死，可見心臟體積增大，缺血心肌萎縮變薄，室壁塌陷；顏色明顯較周圍正常心肌組織淺，呈蒼白色。缺血區(qū)的室壁肌肉組織基本被纖維組織所代替。TTC染色結(jié)果顯示，模型大鼠的心肌能觀察到明顯的灰白色區(qū)域，即心梗后MF的區(qū)域；表明本實(shí)驗(yàn)所需的心梗后MF動(dòng)物模型被成功復(fù)制。
　　2.心肌組織Masson染色結(jié)果
　　Masson染色結(jié)果表明，假手術(shù)組大鼠心肌纖維排列規(guī)則，界限清楚，無炎性細(xì)胞浸潤。心梗后MF模型組大鼠梗死

9、心肌為大量結(jié)構(gòu)紊亂的纖維組織替代，纖維化明顯，并有大量炎性細(xì)胞浸潤，偶爾可見島狀存活的心肌細(xì)胞。三個(gè)不同劑量的EGb761治療后，大鼠心梗后MF程度明顯減輕，并且銀杏葉提取物劑量越大，治療效果越明顯；表現(xiàn)為膠原纖維減少，存活的心肌細(xì)胞增多，炎癥細(xì)胞浸潤減輕。
　　3.放射免疫法檢測(cè)血中HA含量結(jié)果
　　放射免疫分析結(jié)果表明，假手術(shù)組大鼠血中HA含量較低，而心梗后MF模型組大鼠血中HA含量明顯增高（P<0.01）；表明纖維化的

10、血清標(biāo)志物水平在心梗后 MF的動(dòng)物模型中明顯增高。在模型+銀杏葉提取物EGb761組，給予大鼠三個(gè)不同劑量的EGb761治療后，大鼠血中HA含量明顯降低（P<0.01）；表明銀杏葉提取物可改善心梗后MF大鼠纖維化的血清標(biāo)志物。
　　結(jié)論：結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支可造成明顯的心梗后MF，銀杏葉提取物EGb761可顯著減輕心梗后MF大鼠心肌組織的纖維化程度。心梗后MF動(dòng)物模型的纖維化血清標(biāo)志物HA水平明顯增高，而銀杏葉提取物EGb76