TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及對細(xì)胞增殖和周期的影響.pdf

1、腎透明細(xì)胞癌臨床常見，惡性度較高，尤其是晚期轉(zhuǎn)移性患者，外科手術(shù)、放療、化療均不敏感，成為治療的難點。腎透明細(xì)胞癌中存在很多基因突變，近年來尋找切實有效的分子靶點，開展分子靶向治療及早期診斷顯示出更大的臨床優(yōu)勢。TFAP2α是一種轉(zhuǎn)錄因子，在很多腫瘤類型中表達(dá)異常，被認(rèn)為與腫瘤發(fā)生發(fā)展機制有著密切關(guān)系。但TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌中的研究報道很少見到。
　　目的:本實驗旨在研究TFAP2α在人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞、組織中的表達(dá)，探討腫

2、瘤組織中TFAP2α水平與臨床資料的相關(guān)性;并在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系中，通過下調(diào)或上調(diào)TFAP2α的表達(dá)，檢測其對腫瘤細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響，從而探索TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的生物學(xué)意義。
　　方法:1.PCR及Western-blot檢測腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系(769-P、Caki-2、786-O、Caki-1、ACHN、A498、SN12-PM6)與正常腎小管上皮細(xì)胞系(HKC、HK2)中TFAP2α的表達(dá)水平差異

3、;免疫組織化學(xué)方法檢測12例腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織及對應(yīng)瘤旁組織中TFAP2α表達(dá)，PCR法檢測49例腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織和相應(yīng)瘤旁組織中TFAP2α表達(dá)水平差異，并分析與臨床資料的相關(guān)性。2.運用RNA干擾技術(shù)，在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O中，轉(zhuǎn)染siRNA下調(diào)TFAP2α的表達(dá)，檢測786-O細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的變化。3.構(gòu)建pLV-EGFP(2A)-TFAP2α質(zhì)粒，上調(diào)TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和Caki-2的表

4、達(dá)，檢測786-O、Caki-2細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的變化。
　　結(jié)果:1.在細(xì)胞系中，腎透明細(xì)胞癌較正常腎小管上皮細(xì)胞中TFAP2α的mRNA水平、蛋白水平均顯著降低(P＜0.05)。在組織中，免疫組化顯示TFAP2α在胞核及胞質(zhì)均有表達(dá)，以胞核為主;腫瘤組織中弱表達(dá)，對應(yīng)瘤旁組織中表達(dá)相對較強;腫瘤組織mRNA平均表達(dá)顯著低于瘤旁組織（P＜0.05）;TFAP2α的mRNA水平在不同性別、年齡、BMI指數(shù)、及T分期等組間的表達(dá)均

5、無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但與腎透明細(xì)胞癌Fuhrman分級呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，F(xiàn)uhrman分級越高，TFAP2α表達(dá)水平越低。2.成功轉(zhuǎn)染siRNA-TFAP2α下調(diào)腎透明細(xì)胞癌TFAP2α表達(dá)，MTS及平板克隆實驗顯示下調(diào)TFAP2α后細(xì)胞增殖率明顯增高(P＜0.05)，流式細(xì)胞術(shù)顯示siRNA組G0/G1期細(xì)胞比例顯著降低，S期細(xì)胞比例顯著升高(P＜0.05)，而G2/M期比例無顯著差異(P＞0.05)，細(xì)胞快速進(jìn)入S

6、期而促進(jìn)細(xì)胞增殖。3.成功構(gòu)建pLV-EGFP(2A)-TFAP2α質(zhì)粒上調(diào)腎透明細(xì)胞癌TFAP2α表達(dá)，MTS及平板克隆實驗顯示上調(diào)TFAP2α后細(xì)胞增殖率明顯降低(P＜0.05)，流式細(xì)胞術(shù)顯示質(zhì)粒組G0/G1期細(xì)胞比例顯著升高，S期細(xì)胞比例均顯著降低(P＜0.05)，而G2/M期比例無顯著差異(P＞0.05)，阻滯于G1/S期而抑制細(xì)胞增殖。
　　結(jié)論:TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌中異常低表達(dá)，與其惡性分化程度存在相關(guān)性;TF