維生素B1及其衍生物對糖尿病周圍神經(jīng)病變的影響.pdf

1、背景與目的：
　　糖尿病神經(jīng)病變（diabetic periphery neuropathy，DPN）是多發(fā)的糖尿病慢性并發(fā)癥之一，嚴(yán)重影響患者壽命和生活質(zhì)量。良好的血糖控制可以延緩糖尿病神經(jīng)并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展，但并不能徹底阻止神經(jīng)并發(fā)癥的出現(xiàn)。國內(nèi)外學(xué)者先后提出了神經(jīng)炎性因子、多元醇通路、山梨醇途徑、己糖胺通路、線粒體氧化應(yīng)激及綜合學(xué)說等，目前較為認(rèn)可的是綜合性學(xué)說。
　　近年來，代謝因素在糖尿病神經(jīng)病變的研究中逐漸受到關(guān)

2、注。早在2003年Nature Medicine雜志有學(xué)者提出：糖尿病神經(jīng)病變患者體內(nèi)維生素含量相對缺乏，補(bǔ)充維生素B1及其衍生物可通過增強(qiáng)磷酸戊糖途徑來改善糖尿病神經(jīng)病變的發(fā)生。但由于維生素B1本身具有兩方面生理功能：輔酶作用（糖代謝過程中的重要輔酶）和非輔酶作用。其中后者通過抑制膽堿酯酶活性，維持神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的有效濃度，從而完成神經(jīng)沖動(dòng)的正常傳遞。維生素B1是通過輔酶的啟動(dòng)因子作用或（和）非輔酶的輔助功能作用來改善糖尿病神經(jīng)病變

3、的呢?國內(nèi)外鮮有論及。為回答這個(gè)問題，本研究通過檢測糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠體內(nèi)維生素的代謝狀況，對其體內(nèi)神經(jīng)炎性因子、膽堿酯酶濃度進(jìn)行量化分析，結(jié)合透射電鏡下觀察神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)的改變，由此來探討維生素B1及其衍生物的缺乏對糖尿病周圍神經(jīng)病變的影響環(huán)節(jié)及機(jī)制，為臨床有效預(yù)防和治療糖尿病神經(jīng)病變代謝紊亂提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1 DM、DPN大鼠模型制備：
　　DM大鼠模型：體重為200-220g的雄性大鼠，給與1

4、％的鏈脲霉素（streptozotocin，STZ）55ml/kg腹腔注射，72小時(shí)后，針刺尾尖取血，用血糖儀測隨機(jī)血糖≥16.7mmol/L的大鼠即為DM模型大鼠。
　　DPN大鼠模型:基于前期實(shí)驗(yàn)，取DM大鼠監(jiān)測其運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（motor nerve conduction velocity，MNCV）的測定，與血糖正常大鼠相比，當(dāng)糖尿病大鼠的坐骨神經(jīng)MNCV減慢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，DPN模型大鼠造模成功。
　　2實(shí)

5、驗(yàn)分組：
　　NC組：血糖正常大鼠（20只）；DM組：糖尿病模型大鼠（2周，20只）；DPN組：糖尿病神經(jīng)病變大鼠（12周，20只）；VB1組：補(bǔ)充維生素B1的糖尿病神經(jīng)病變大鼠（12周，20只）。
　　3測定項(xiàng)目：
　　①.血清維生素B1含量的電化學(xué)法檢測
　　取大鼠靜脈血2ml，低速離心電化學(xué)法檢測血清中維生素B1含量
　　②.血清中AchE含量的測定
　?、?血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)超氧化物歧化物（S

6、OD）及丙二醛（MDA）及神經(jīng)組織中NF-kB含量
　　4透射電鏡觀察：
　　冰水浴中，在4%戊二醛中將坐骨神經(jīng)組織切為1mm×1mm×1mm大小制備透射電鏡標(biāo)本。在透射電子顯微鏡（transmission electron microscope，TEM）下觀察坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　結(jié)果：
　　1、成模情況：
　　B組糖尿病組（DM組）在第2周穩(wěn)定成模，無糖尿病神經(jīng)并發(fā)癥的發(fā)生；C組糖尿病神經(jīng)病變組

7、（DPN組）在12周成模；D組（VB1組），DM成模后，補(bǔ)充維生素B1，喂養(yǎng)12周，作為VB1組。
　　2維生素含量變化：
　　與NC組相比，DM組血清維生素B1含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；DPN組維生素B1含量下降，差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與DM組、VB1組相比，DPN組維生素B1下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。與DPN組相比，VB1組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0

8、5）。
　　3血清中SOD、MDA及神經(jīng)組織中NF-kB含量變化：
　　與 NC組相比，DM組、DPN組 SOD含量均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與NC組相比，DM組、DPN組及VB1組MDA及NF-kB含量增加，差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。VB1組與DPN組相比，SOD含量增加差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），MDA及NF-kB含量減少，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　4乙酰膽堿酯酶

9、含量變化：
　　與正常對照組相比，DM組、DPN組含量均下降。DPN組較NC組含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與NC組相比，VB1組及DM組乙酰膽堿酯酶含量下降，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　5形態(tài)學(xué)變化:
　　電鏡下可觀察到： NC組及DM組大鼠坐骨神經(jīng)髓鞘薄厚均勻，板層之間排列致密有序，呈同心圓形；軸索內(nèi)電子密度均勻；雪旺細(xì)胞及線粒體正常。DM組髓鞘開始呈現(xiàn)扭曲狀，但神經(jīng)纖維板層排列尚緊密，無