蛋白質(zhì)芯片技術(shù)檢測aGVHD患者22種血清生物標(biāo)志物的臨床意義.pdf

1、目的:異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplant，allo-HSCT)是治療血液惡性疾病的有效手段。急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease，aGVHD)是allo-HSCT常見的并發(fā)癥，嚴(yán)重影響了移植患者的存活率及生存質(zhì)量，同時也是allo-HSCT患者非復(fù)發(fā)死亡的主要原因?，F(xiàn)階段，機(jī)體受損靶器官的臨床表現(xiàn)和病理檢查是aGV

2、HD診斷的主要依據(jù)，但由于其臨床癥狀多變且缺乏特異性，在臨床診療中有創(chuàng)的病理檢查常常因為各種原因而無法進(jìn)行，導(dǎo)致其診斷的及時性受到影響。因此，找到快捷、無創(chuàng)、實用的實驗室方法，讓aGVHD患者在疾病早期就可以得到診斷并盡早治療，從而更有效地控制aGVHD是臨床上迫切需要解決的問題。
　　蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是一門微機(jī)械、微電子并與生命科學(xué)相結(jié)合的新興技術(shù)，具有高特異性、高靈敏度、自動化、微型化等特點。本研究采用夾心法膜蛋白質(zhì)芯片技術(shù)檢測

3、異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)后發(fā)生aGVHD和無aGVHD患者的22種血清生物標(biāo)志物水平變化，初步篩選出和aGVHD發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸相關(guān)的分子標(biāo)志物，為后續(xù)aGVHD的臨床早期干預(yù)和預(yù)后評估奠定基礎(chǔ)。
　　方法:連續(xù)定點收集于2014年11月至2015年11月在第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院血液科進(jìn)行allo-HSCT患者移植-7d、+7d、+14d、+28d、+56d、+100d血清標(biāo)本。選取10名發(fā)生aGVHD的患者作為實驗組，在未發(fā)生aGVH

4、D患者中隨機(jī)抽取10名作為對照組。采用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)檢測兩組患者在移植前后不同時間點22種血清生物標(biāo)志物(IL-1β、IL-2、 IL-4、IL-6、IL-7、 IL-8、IL-10、IL-12p40、IL-17A、IL-21、IL-22、IL-23、MIF、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、Elafin、ST2、TLR4、TNFR1、vWF、TF)的含量。采用AAH-CUST的數(shù)據(jù)分析軟件對芯片檢測結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)預(yù)分析，并進(jìn)行t檢驗，

5、數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）”表示。
　　結(jié)果:1.蛋白芯片檢測發(fā)現(xiàn)，aGVHD組和無aGVHD組相比較，移植-7d，aGVHD組和無aGVHD組各血清生物標(biāo)志物之間無顯著差異(P＞0.05);移植+7d，aGVHD組IL-2、IL-17A、ST2、TLR4水平顯著高于無aGVHD組(P＜0.05);移植+14d，aGVHD組IL-2、IL-4、IL-17A、IL-21、IL-23、TNFR1水平顯著高于無aGVHD組(P＜

6、0.05)，而IFN-γ水平顯著低于無aGVHD組(P＜0.05);移植+28d，IL-2、IL-7、IL-17A、TNFR1，aGVHD組水平顯著高于無aGVHD組(P＜0.05)，IFN-γ水平顯著低于無aGVHD組(P＜0.05);移植+56d, IL-1β、IL-2、IL-4、IL-7、IL-17A、IL-21、IL-23、ST2、TF, aGVHD組水平顯著高于無aGVHD組(P＜0.05);移植+100d，aGVHD組IL-

7、7、IL-23、TF水平顯著高于無aGVHD組(P＜0.05)。
　　2.Ⅲ-Ⅳ級aGVHD與Ⅱ級aGVHD比較:移植-7d，IL-8血清水平前者較后者顯著增高(P＜0.05);移植+7d，IL-1β、IL-22血清水平前者較后者顯著增高(P＜0.05);移植+14d，兩組間各血清生物標(biāo)志物水平無顯著差異(P＞0.05);移植+28d，TLR4血清水平前者較后者顯著增高(P＜0.05);移植+56d，TNFR1血清水平前者較后者顯

8、著增高(P＜0.05);移植+100d，IL-21血清水平前者較后者顯著下降(P＜0.05)。
　　3.aGVHD組患者在治療前后22個血清生物標(biāo)志物比較，發(fā)現(xiàn)aGVHD患者治療有效控制后TLR4水平較高峰時出現(xiàn)顯著下降(P＜0.05)。
　　4.激素療效差和療效好的aGVHD患者相比較:移植-7d，IL-7血清水平前者較后者顯著降低(P＜0.05);移植+7d，IL-17A血清水平前者較后者顯著降低(P＜0.05);移植+

9、14d，兩組間各血清生物標(biāo)志物水平無顯著差異(P＞0.05);移植+28d，IL-23血清水平前者較后者顯著降低(P＜0.05);移植+56d，IL-6、IL-12p40血清水平前者較后者顯著增高(P＜0.05);移植+100d，IL-8、IL-22、ST2、TNFR1血清水平前者較后者顯著增高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.蛋白質(zhì)芯片檢測發(fā)現(xiàn)aGVHD組較無aGVHD組共有12個血清生物標(biāo)志物(IL-1β、IL-2、IL-4、

10、IL-7、IL-17A、IL-21、IL-23、IFN-γ、ST2、TLR4、TNFR1、TF)在移植前后各不同時間點表達(dá)有顯著差異，其和aGVHD的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)，可將其作為aGVHD早期診斷及干預(yù)的輔助指標(biāo)。
　　2.與Ⅱ級aGVHD相比，Ⅲ-Ⅳ級aGVHD有5個血清標(biāo)志物(IL-1β、IL-8、IL-22、TLR4、TNFR1)高表達(dá)，1個(IL-21)低表達(dá)，表明這6個血清標(biāo)志物表達(dá)水平可能和aGVHD嚴(yán)重程度相關(guān)，可作