酶和蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物光學(xué)分析新方法.pdf

1、生物傳感技術(shù)已成為生命科學(xué)、分析化學(xué)重要的研究方法，并具有廣泛的應(yīng)用前景。光學(xué)生物傳感器具有檢測限低、分析速度快、能夠?qū)崿F(xiàn)實(shí)時(shí)無損分析等諸多優(yōu)點(diǎn)。酶、蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，其含量已經(jīng)成為臨床診斷一些疾病的重要標(biāo)志。因此，建立簡單快速檢測酶和蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物的分析方法具有重要的意義。本文以兩種重要的酶-胸腺嘧啶DNA糖基化酶和組蛋白去甲基化酶，以及C-反應(yīng)蛋白為研究對(duì)象，發(fā)展了檢測酶和蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物光學(xué)分析新方法。具體內(nèi)容包括:<

2、br>　　 (1)胸腺嘧啶DNA糖基化酶(TDG)在維持基因組完整性和表觀遺傳調(diào)控方面扮演著關(guān)鍵角色。本文報(bào)告了一種基于外切酶介導(dǎo)的信號(hào)放大，均相熒光法靈敏檢測TDG活性的新方法。TDG從G/T錯(cuò)配中切除T而后引發(fā)內(nèi)切酶Ⅳ和T7核酸外切酶兩個(gè)連續(xù)的降解反應(yīng)。結(jié)果顯示，TDG酶活性測定顯示的動(dòng)態(tài)范圍從0到0.083 U/μL，檢測下限為0.00018 U/μL。該檢測方法具有靈敏度高、選擇性好、重現(xiàn)性好、成本低、實(shí)驗(yàn)設(shè)備簡單等優(yōu)點(diǎn)。綜上

3、表明這種策略在TDG活性和相關(guān)的生化功能研究上將有相當(dāng)大的發(fā)展?jié)摿Α?br>　　 (2)發(fā)展了一種基于表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)，使用甲醛選擇性活性探針(Purpald)，通過直接觀察副產(chǎn)物甲醛分析組蛋白去甲基化酶活性(HDMs)的新方法。我們的傳感方法依賴于Purpald和甲醛加成產(chǎn)物共價(jià)結(jié)合在納米金上傳導(dǎo)SERS信號(hào)。這種納米傳感器在均相反應(yīng)中有信噪比高、特異性強(qiáng)、快速、簡便和重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。這項(xiàng)工作是基于SERS使用Purpa

4、ld檢測HDMs的第一個(gè)例子。我們發(fā)展的分析方法為HDMs表征和相關(guān)生物功能研究提供一個(gè)簡單、高性能的平臺(tái)。
　　 (3)我們以C-反應(yīng)蛋白(CRP)為分析模型，發(fā)展了一種基于納米金的比色分析法，簡單、快速、靈敏的檢測蛋白質(zhì)的新方法。CTAB穩(wěn)定的納米金顆粒與DPPC結(jié)合之后，納米金表面吸附存在了大量磷脂酰膽堿，在Ca2+的存在下磷脂酰膽堿與CRP進(jìn)行配位，那么納米顆?？臻g距離縮短發(fā)生顏色改變，紫外可見吸收光譜也發(fā)生變化。據(jù)此可