TL1A在結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌動物模型中作用的初步探討.pdf

1、近年來，炎癥與腫瘤的關(guān)系迅速成為研究領(lǐng)域的熱點，大量臨床和基礎(chǔ)研究均表明，炎癥與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌(colitis-associated cancer，CAC)是一種與炎癥性腸病(inflammation boweldisease，IBD)密切相關(guān)的結(jié)直腸癌，占IBD患者死因的15％，是其最嚴重的并發(fā)癥。流行病學(xué)統(tǒng)計表明，IBD的發(fā)病率逐年上升，因此對其遠期并發(fā)癥的防治工作也變得尤為重要。
　　CAC的形

2、成經(jīng)歷了從炎癥-異型增生-癌癥的演變過程，在這一過程中涉及多種免疫細胞、炎癥因子及其他免疫介質(zhì)。這些炎癥因子與免疫介質(zhì)通過炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激共同作用于腸粘膜，引起多種基因發(fā)生突變，抑制細胞凋亡，促進細胞增殖、轉(zhuǎn)移，從而促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。然而，目前其促進結(jié)直腸腫瘤發(fā)生、發(fā)展的具體機制尚未明確。
　　腫瘤壞死因子樣配體1A(tumor necrosisfactor ligand-relatedmolecule1A，TL1A)是腫瘤

3、壞死因子超家族成員，其受體包括死亡受體3（death receptor3，DR3）和誘騙受體3(decoy receptor3，DcR3)。 TL1A及其受體可通過影響腸黏膜免疫細胞，導(dǎo)致腸黏膜免疫系統(tǒng)耐受機制紊亂，誘導(dǎo)炎癥介質(zhì)產(chǎn)生，引發(fā)腸道炎癥反應(yīng)，從而參與IBD的發(fā)生。同時，在多種腫瘤中，TL1A可以通過調(diào)控促進內(nèi)皮細胞凋亡、加重氧化應(yīng)激反應(yīng)和調(diào)控炎癥通路活化從而影響腫瘤的進展。那么，作為IBD的重要調(diào)控因子，TL1A是否也影響結(jié)腸

4、炎相關(guān)結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展？為此，我們選用高表達TL1A的轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型鼠，建立CAC模型，以期從中得到答案。
　　目的:建立AOM+DSS誘導(dǎo)的小鼠實驗性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌模型，初步探討其在CAC過程中的作用。
　　方法:(1)采用real-time Q-PCR方法進行LCK-CD2-TL1A-GFP基因型小鼠的鑒定與篩選;(2)通過氧化偶氮甲烷(azoxymethane，AOM)聯(lián)合葡聚糖硫酸鈉(dextran su

5、lfate sodium，DSS)建立實驗性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌模型，將Tg小鼠與C57BL/6 WT小鼠(8-12周)隨機分為Control/WT組、AOM/WT組、DSS/WT組、AOM+DSS/WT組、Control/Tg組、AOM/Tg組、DSS/Tg組、AOM+DSS/Tg組，每組10只。AOM組在實驗第一天接受單劑量10mg/Kg AOM腹腔注射后正常飲食，DSS組間斷飲用2.5％DSS水，AOM+DSS組單劑量注射10mg/

6、Kg AOM聯(lián)合間斷飲用2.5％DSS水。DSS組和AOM+DSS組小鼠飲用2.5％的DSS水7天后，改為飲用蒸餾水14天，此為一個造模循環(huán)，4個循環(huán)后造模結(jié)束;(3)結(jié)腸黏膜炎癥程度的評估包括疾病活動指數(shù)(Disease activity index，DAI)、結(jié)腸形態(tài)學(xué)變化和組織病理學(xué)評分;(4)腫瘤生成情況的評估包括腫瘤的數(shù)目、直徑、成瘤率，采用免疫組織化學(xué)染色、Western blot技術(shù)檢測PCNA蛋白表達以明確細胞增殖情況;

7、(5)進行組織病理學(xué)評分評估其異型增生程度;(6)結(jié)腸組織中炎癥反應(yīng)、異型增生及腫瘤直徑的相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:(1)根據(jù)基因LCK-CD2-TL1A-GFP序列測定小鼠DNA，Tg小鼠目的基因測定成像在192 bp位置，而WT小鼠基因測定成像，在192 bp位置未檢測到目的基因，據(jù)此篩選鑒定Tg小鼠;(2)在兩種小鼠中，與Control組相比，DSS組和AOM+DSS組小鼠體重明顯減輕，DAI顯著升高，結(jié)腸壁充血水腫、長度縮短

8、，結(jié)腸組織病理切片可見大量炎癥細胞浸潤，黏膜上皮細胞損傷脫落，形成淺潰瘍，病理組織學(xué)評分顯著增加;Control組和AOM組的腸道改變均無明顯差異;DSS/Tg組、AOM+DSS/Tg分別較DSS/WT組、AOM+DSS/WT組腸道炎癥反應(yīng)增強;(3)AOM+DSS組可見結(jié)腸多發(fā)結(jié)節(jié)、息肉樣隆起，突向腸腔，多位于中遠段。與WT小鼠比較，Tg小鼠瘤體數(shù)目增多(P＜0.05)、直徑增大(P＜0.05)，且成瘤率明顯高于野生型鼠(88.9％

9、vs66.7％);根據(jù)細胞異型程度分級，AOM+DSS/Tg組小鼠腫瘤多為重度異型增生(60％)，野生型小鼠重度異型增生所占比例(44.6％)。根據(jù)細胞異性增生程度評分，AOM+DSS/Tg組明顯高于AOM+DSS/WT組（2.75±0.5 vs1.70±0.8，P＜0.05）;(4)免疫組織化學(xué)檢測、Western blot檢測結(jié)果顯示兩種小鼠中，AOM+DSS組PCNA的水平明顯高于其他各組（P＜0.05），相對于AOM+DSS/W