RIPPLY2基因變異對(duì)散發(fā)半椎體畸形的致病性評(píng)估.pdf

1、先天性脊柱側(cè)凸(Congenital scoliosis，CS)是由胚胎期椎體發(fā)育異常導(dǎo)致的脊柱三維畸形。臨床上定義冠狀面脊柱側(cè)方彎曲≥10°為脊柱側(cè)凸，若存在椎體畸形則稱為CS。CS具有畸形重、進(jìn)展快、并發(fā)癥多等特點(diǎn)，嚴(yán)重時(shí)可致患者癱瘓，是造成青少年殘疾的主要疾病之一，給家庭和社會(huì)帶來(lái)極大負(fù)擔(dān)。
　　脊椎動(dòng)物胚胎發(fā)育時(shí)期存在一個(gè)非常保守而重要的分節(jié)過(guò)程，稱為體節(jié)發(fā)生。每個(gè)體節(jié)最終發(fā)育成椎體、椎旁肌、真皮等，體節(jié)形成異常即可導(dǎo)致先

2、天性椎體畸形。CS確切病因尚不明確，目前無(wú)有效的預(yù)測(cè)手段，治療仍以支具或手術(shù)治療來(lái)糾正畸形、防止進(jìn)展為主，因此探尋其發(fā)病原因，對(duì)于從病因上控制發(fā)病率、早期診斷和早期干預(yù)這種嚴(yán)重致殘性脊柱畸形疾病、緩解家庭和社會(huì)負(fù)擔(dān)具有重要意義。遺傳因素在CS發(fā)病中的作用逐漸被人們重視。2015年，我課題組發(fā)現(xiàn)TBX6基因拷貝數(shù)變異(CNV)聯(lián)合單核苷酸變異(SNV)導(dǎo)致半椎體畸形，解釋了CS11％的病因，指明應(yīng)該從SNV、CNV多個(gè)突變水平探尋疾病的遺

3、傳學(xué)病因。
　　早在2005年人們就發(fā)現(xiàn)了ripply家族在體節(jié)發(fā)生過(guò)程中的重要作用，RIPPLY2與TBX6形成負(fù)反饋調(diào)節(jié)通路，調(diào)控體節(jié)發(fā)生過(guò)程。2015年，連續(xù)2例臨床報(bào)道提示RIPPL Y2基因可能是CS的重要病因。然而RIPPL Y2基因變異對(duì)CS的貢獻(xiàn)率如何尚無(wú)從得知。
　　目的:
　　從SNV和CNV的水平探尋CS半椎體畸形患者中RIP兒Y2基因的變異，探索致病機(jī)制，驗(yàn)證貢獻(xiàn)率。
　　方法:
　

4、　通過(guò)二代測(cè)序技術(shù)，對(duì)109例CS半椎體畸形患者進(jìn)行篩查，從SNV和CNV兩個(gè)水平探尋RIPPLY2基因變異。并對(duì)其中一例罕見(jiàn)RIPPL Y2基因CNV患者核心家系進(jìn)行全基因組測(cè)序。原始數(shù)據(jù)經(jīng)嚴(yán)格的質(zhì)量控制后進(jìn)行注釋，對(duì)罕見(jiàn)、高致病性變異進(jìn)行解析。
　　結(jié)果:
　　109例CS半椎體表型的患者（包括CSⅠ型和Ⅲ型），排除10例TBX6缺失或者無(wú)義突變的患者，在其余99例患者中共檢測(cè)到3例患者存在SNV水平的突變c.17G＞A

5、(p.G6D)、c.29C＞A(p.T10K)、c.177G＞A(p.M59I)，均為雜合的錯(cuò)義突變，其在公共數(shù)據(jù)中均為新發(fā)突變(novel);共檢測(cè)到一例患者存在RIPPL Y2基因所在區(qū)域的重復(fù)變異(duplication)，全基因組測(cè)序、PCR實(shí)驗(yàn)證實(shí)該CNV遺傳自母親，未能找到父系來(lái)源且與RIPPL Y2存在密切調(diào)控關(guān)系的罕見(jiàn)、高致病性基因突變。
　　結(jié)論:
　　RIPPLY2基因SNV及CNV水平的變異可能與CS半