我國11株H5N2亞型AIV的基因特征及對禽的致病性研究.pdf

1、自1983年，美國賓夕法尼亞州雞體內首次出現H5N2亞型禽流感病毒（Avianinfluenza virus，AIV）至今，H5N2亞型禽流感病毒已在世界范圍內廣泛流行，并引起不同程度的禽流感疫情。我國于2005-2006年在江西省鄱陽湖和黑龍江省扎龍濕地的正常野鴨體內分離到11株H5N2亞型禽流感病毒。為了解我國野生水禽攜帶的H5N2亞型禽流感病毒的生物學特性與致病性，本研究首先對這11株H5N2亞型禽流感病毒進行了全基因組序列測定、

2、同源性比較及遺傳演化分析；在此基礎上就分離自不同地域的病毒代表株對家禽的感染和致病能力進行了評估。
　　 病毒的全基因組序列測定、同源性比較及遺傳演化分析：利用Trizol Ls RNA提取試劑盒從各病毒株感染的雞胚尿囊液中提取RNA，采用RT-PCR技術擴增所有毒株各個基因片段的cDNA。產物經純化后在CEQ8000基因測序儀上進行序列測定。用DNASTAR分析軟件包進行序列的數據編輯、翻譯、進化樹的繪制和遺傳演化分析。結果表

3、明，11株H5N2亞型禽流感病毒同屬于歐亞種系，并且可以劃分為6個基因型。2005年分離自江西省的10株H5N2亞型禽流感病毒HA基因裂解位點均具有4～6個連續(xù)的堿性氨基酸，具有高致病性禽流感病毒HA蛋白裂解位點的基因特征。10株病毒的HA、NA、PA和NP基因核苷酸和氨基酸的同源率較高，在95％-100％和93.9％-98.4％之間；并且10株病毒的HA、NP和NS基因與引起我國2004-2005年南方家禽流感疫情的高致病性禽流感病毒

4、代表株DK/JX/25/04（H5N1）的核苷酸最高同源率都在97.7％以上。2006年分離自黑龍江省的1株H5N2亞型禽流感病毒HA基因裂解位點為R-E-T-R，屬于典型的H5亞型低致病力毒株；該毒株在核苷酸同源性上與江西省的10株病毒差異較大。遺傳進化上，11株病毒的HA、NA、PB1、PA和NS基因進化關系較近，但分別以不同的毒株為祖先進化而來，PB2、NP和M基因在各自的進化關系上距離較遠。另外，江西省的10株病毒在HA和PA基

5、因進化關系上與2004-2005年我國南方家禽中流行的H5N1高致病性禽流感病毒較近，都以GS/GD/1/96（H5N1）為祖先進化而來。
　　 代表毒株對家禽的感染和致病能力評估：感染實驗以106EID50的病毒量鼻腔感染SPF雞和SPF鴨后，于第3、5天分別剖殺感染的實驗動物3只，采集喉頭拭子、泄殖腔拭子和各組織臟器，進行病毒含量滴定和病理組織學觀察。致病力實驗采用國際OIE IVPI方法，10倍稀釋病毒感染的雞胚尿囊液，0

6、.2 mL/只靜脈接種4周齡SPF雞和SPF鴨各10只，觀察10天。結果表明：分離自江西省的10株H5N2亞型禽流感病毒的代表株Mallard/JX/I16/05對SPF雞和SPF鴨的IVPI分別為3.0和2.42，均大于1.2，表現出很強的致病能力。而分離自黑龍江省Mallard/HLJ/134/06毒株對SPF雞和SPF鴨均不表現任何臨床癥狀。鼻腔感染SPF雞和SPF鴨后，Mallard/JX/I16/05毒株對實驗動物表現出很高的

7、致死率，且表現出典型的神經癥狀，剖檢可見腦膜點狀出血，胸腺出血、腫脹，肝臟腫大、呈淡土黃色，肺臟表面出血、充血，脾臟腫大出血。病理組織學檢查發(fā)現大腦呈典型的病毒性腦炎病變，全身各器官以出血、充血、細胞變性壞死和淋巴細胞浸潤為主要特征。喉頭及泄殖腔拭子和各臟器均可分離到病毒。而Mallard/HLJ/134/06毒株對實驗動物的致死率為0，且無臨床癥狀，除了能在氣管和法氏囊分離到少量的病毒外，其他器官均分離不到病毒。但攻毒后21天，感染和