模式昆蟲赤擬谷盜AChE的毒理學(xué)特性研究.pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文模式昆蟲赤擬谷盜AChE的毒理學(xué)特性研究姓名：安峰明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：農(nóng)藥學(xué)指導(dǎo)教師：王進(jìn)軍20090501兩南大學(xué)碩十學(xué)何論文殺威和J 。硫克百威共8 種抑制劑對(duì)赤擬谷盜A C h E 的抑制作用。研究發(fā)現(xiàn)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑對(duì)赤擬谷盜頭、胸、腹A C h E 均有一定的抑制作用，有機(jī)磷類殺蟲劑對(duì)赤擬谷盜A C h E 的抑制作用更強(qiáng)。其中，乙基對(duì)氧磷、甲基內(nèi)吸磷和甲基對(duì)氧磷的抑制作用較好。其抑制中濃度

2、較其他有機(jī)磷類殺蟲劑的抑制中濃度更低，氧化樂果和毒死蜱對(duì)赤擬谷盜頭部A C h E的離體抑制作用較弱。氨基甲酸酯類殺蟲劑對(duì)赤擬谷盜頭部的A C h E 也有一定的抑制作用，殘殺威對(duì)A C h E 的抑制作用優(yōu)于丁硫克百威，但它們的抑制中濃度均高于有機(jī)磷類殺蟲劑的抑制中濃度。3 赤擬谷盜酯酶同工酶和蛋白質(zhì)電泳圖譜的研究采用S D S ．P A G E 法，用考馬斯亮藍(lán)R 2 5 0 染色，對(duì)赤擬谷盜體軀各部分( 頭、胸、腹) 總蛋向分別進(jìn)

3、行蛋白質(zhì)電泳，圖譜顯示赤擬谷盜胸部的蛋白總量高于頭部和腹部，頭部蛋白含量最低，但其種類較多。酯酶同工酶電泳結(jié)果表明赤擬谷盜頭部、胸部和腹部的酯酶種類不同，酯酶同工酶分子量也相差較大，其中頭部高分子量的譜帶所占比例大于腹部，胸部酯酶同工酶高分子量的譜帶最少；赤擬谷盜體內(nèi)主要有2 種酯酶同T 酶E S T l 和E S T 2 ，E S T l 含量相對(duì)較高，即赤擬谷盜體內(nèi)包含a ．酯酶和B ．酯酶，a ．酯酶含量相對(duì)較多。4 種殺蟲劑對(duì)赤

4、擬谷盜酯酶同工酶的抑制作用強(qiáng)度順序依次為：對(duì)氧磷> 毒死蜱> 丁硫克百威> 馬拉硫磷；赤擬谷盜頭部的酯酶同工酶對(duì)這4 種殺蟲劑均比較敏感。4 赤擬谷盜A C h E 基因的克隆及序列分析采用c D N A 末端快速擴(kuò)增技術(shù)( R A C E ) ，克隆得到1 6 8 2 b p 的基岡序列( 缺少3 ’端) ，該基岡包括由1 5 1 個(gè)核茁酸組成的5 ' - R A C E 末端序列和由1 5 3 1b p 核

5、苷酸組成的開放閱讀框( O R F ) 。利用該氨基酸在N C B I 站點(diǎn)進(jìn)行序列分析，找到赤擬谷盜基因組計(jì)劃所預(yù)測(cè)的A C h E基因全汝，尋找其對(duì)應(yīng)的氨基酸序列位置，獲得所對(duì)應(yīng)的赤擬谷盜A C h E 基因3 “ - R A C E 末端，進(jìn)而進(jìn)行序列拼接及分析，從而預(yù)測(cè)得到2 0 4 7 b p 赤擬谷盜A C h E 基因全長(zhǎng)。將預(yù)測(cè)的赤擬谷盜A C h E 氨基酸序列提交到N C B I ，進(jìn)行核苷酸與蛋白質(zhì)( B 乙氣S

6、T P ) 同源性比對(duì)，發(fā)現(xiàn)該氨基酸序列與赤擬谷盜基因組計(jì)劃預(yù)測(cè)的A C h E 的同源性最高，達(dá)到9 3 ％；與褐飛虱N i l a p a r v a t al u g e n sA C h E 的同源性達(dá)到7 3 ％，與黑尾葉蟬N e p h o t e t t i x c i n c t i c e p sA C h E的同源性達(dá)劍7 6 ％。通過(guò)對(duì)赤擬谷盜、果蠅和電鰩A C h E 的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)的赤擬谷盜A

7、C h E具有該家族所有的保守性功能位點(diǎn)： ( 1 ) 保守的催化三聯(lián)體$ 2 5 6 ，E 3 8 5 ，H 4 9 8 ( 2 ) 六個(gè)保守的半胱氨酸殘基形成三對(duì)二硫鍵( C 1 0 6 ．1 3 3 ，C 3 1 0 ．3 2 5 ，C 4 6 0 ．5 7 6 ) ： ( 3 ) 保守的氧陰離子洞G 1 6 9 ，G 1 7 0 ，A 2 5 7 ； ( 4 ) F G E S A G 序列。另外與電鰩A C h E 比較發(fā)現(xiàn)，