氧糖剝奪損傷誘導星形膠質細胞分泌IL-10抑制神經元凋亡.pdf

1、第一部分 OGD損傷星型膠質細胞分泌IL-10抑制神經元凋亡
　　目的：建立原代星形膠質細胞及原代神經元氧糖剝奪（OGD）模型，探討兩種細胞OGD損傷后IL-10的表達水平及其生物學作用。
　　方法：原代培養(yǎng)星形膠質細胞及原代神經元，并建立這兩種細胞的OGD損傷模型。利用Real-time PCR和ELISA分別檢測OGD損傷的細胞IL-10 mRNA和蛋白表達水平的變化，同時以OGD未損傷為對照組。給予OGD的細胞進行外源

2、性IL-10干預，通過CCK-8試劑盒和Annexin V-FITC/PI試劑盒分別檢測IL-10干預后的OGD星形膠質細胞的細胞增殖和凋亡情況；同時用鈣影像技術和Annexin V-FITC/PI分別檢測IL-10處理的OGD神經元細胞內Ca2+濃度變化及細胞凋亡情況。
　　結果：（1）經GFAP或NSE免疫熒光鑒定，證實原代星形膠質細胞及原代神經元的成功培養(yǎng)，并在此基礎上成功建立了體外OGD損傷模型。（2）Real-time

3、PCR和ELISA方法檢測發(fā)現(xiàn)，OGD損傷可誘導星形膠質細胞中IL-10的mRNA（P=0.026）及蛋白（P=0.032）水平顯著增高；而神經元 OGD組與未損傷組 IL-10表達水平并無明顯差異。（3）外源性IL-10可抑制OGD損傷神經元的早期凋亡（P=0.009）及晚期凋亡（P=0.002），激活胞內 Ca2+的活性（P＜0.0001）；但對 OGD損傷星形膠質細胞的增殖和凋亡均無顯著影響。
　　結論：（1）成功建立了原代

4、星形膠質細胞及原代神經元的OGD損傷模型；（2）OGD損傷誘導星形膠質細胞旁分泌IL-10，抑制OGD損傷的神經元凋亡，激活胞內Ca2+的活性。
　　第二部分 OGD損傷誘導星型膠質細胞IL-10分泌的分子機制
　　目的：探討OGD誘導星形膠質細胞IL-10分泌的具體分子機理。
　　方法：免疫熒光及Western blotting技術檢測OGD損傷的星形膠質細胞中TLR2、NF?B p-p65的蛋白表達水平變化。Wes

5、tern blotting及ELISA技術檢測siTLR2腺病毒干預后或NF?B抑制劑PDTC處理后的OGD星形膠質細胞中 TLR2、p-p65、IL-10的蛋白表達水平變化。最后利用 CHIP-qPCR技術檢測 OGD損傷的星形膠質細胞中 p-p65在IL-10基因啟動子區(qū)域的結合情況。
　　結果：（1）與control組比較，OGD損傷的星形膠質細胞中TLR2（P=0.003）、p-p65（P=0.0001）蛋白表達水平均明顯

6、增高。（2）siTLR2腺病毒干預后的OGD星形膠質細胞中TLR2、p-p65、IL-10蛋白表達水平均較OGD+RFP組顯著下降（P＜0.0001）。（3）NF?B特異性阻斷劑 PDTC處理后的OGD星形膠質細胞中 p-p65（P＜0.0001）及 IL-10（P=0.012）的蛋白表達水平顯著低于PDTC未處理組，但TLR2表達水平兩組間無顯著差異。（4）CHIP-qPCR檢測結果顯示，OGD損傷促進星形膠質細胞中p-p65蛋白與I