長鏈非編碼RNA CRNDE在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制研究.pdf

1、背景:近年來，大量研究發(fā)現不同長鏈非編碼RNA（long non-coding RNAs，lncRNAs）在多種惡性腫瘤中存在特異性異常表達的現象，并且在腫瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲、轉移等過程中可能起到重要的作用。我們前期研究利用lncRNA基因芯片篩選出在胰腺癌組織及癌旁正常胰腺組織中差異表達的長鏈非編碼RNA分子CRNDE（colorectal neoplasia differentially expressed），但其在胰腺癌發(fā)生

2、發(fā)展中的作用及機制仍尚不明確。
　　目的:本研究旨在研究CRNDE對胰腺癌細胞增殖、凋亡與侵襲力的影響;探討CRNDE介導Hippo-YAP通路在胰腺癌細胞惡性轉化中的分子作用機制。
　　方法:
　　1.采用RT-PCR檢測CRNDE在20對胰腺癌組織及癌旁正常胰腺組織中及3種胰腺癌細胞株(AsPC-1、PANC-1和BxPC-3)中的表達情況;運用流式細胞及Transwell實驗探討下調CRNDE表達對胰腺癌細胞增殖

3、、凋亡及侵襲力的影響。
　　2.利用免疫組化檢測胰腺癌組織中Hippo-YAP通路中的關鍵因子LAST1(large tumor suppressor gene1)和YAP1(yes-associated protein)蛋白表達水平，并分析與CRNDE表達的關系;利用Western blot研究下調CRNDE表達對胰腺癌細胞LAST1和YAP1表達的影響，以驗證CRNDE通過介導Hippo-YAP通路促進胰腺癌的發(fā)生發(fā)展的重要作

4、用機制。
　　結果:
　　1.本研究通過RT-PCR檢測20對手術切除的胰腺癌組織和癌旁正常胰腺組織中CRNDE的表達水平，結果證實CRNDE在胰腺癌組織中的表達水平顯著高于癌旁正常胰腺組織(P＜0.05)。同時，研究還發(fā)現在胰腺癌細胞株AsPC-1、PANC-1和BxPC-3中，CRNDE的表達水平也有不同程度的升高。我們以表達水平最高的AsPC-1細胞為研究對象，通過特異性siRNA干擾技術下調AsPC-1細胞中CRND

5、E的表達水平，經流式細胞檢測發(fā)現，下調CRNDE表達后AsPC-1細胞的G1期細胞比例明顯下降，G2/M期細胞比例明顯增加(P＜0.05)，而其細胞凋亡率較對照組明顯提高（P＜0.05）。同時Transwell實驗結果顯示下調CRNDE表達后胰腺癌細胞侵襲能力受到明顯抑制(P＜0.05)。
　　2.采用免疫組化檢測Hippo-YAP通路中LAST1和YAP1的表達情況，結果發(fā)現LATS1蛋白在胰腺癌組織中表達水平較相應癌旁正常胰腺

6、組織顯著下降，同時伴隨YAP1蛋白表達水平的升高。此外，直線回歸分析顯示CRNDE與LAST1和YAP1呈明顯線性關系，其中CRNDE與LAST1呈負相關，CRNDE與YAP1呈正相關。Western blot檢測提示下調胰腺癌AsPC-1細胞CRNDE表達后，LATS1蛋白表達水平明顯上調，而YAP1蛋白表達水平則下降。
　　結論:
　　1.研究結果發(fā)現在胰腺癌中存在CRNDE高表達的現象，CRNDE異常表達促進癌細胞的惡