長鏈非編碼RNA SOX21AS1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及主要機制的探討.pdf

1、目的：
　　胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，目前仍缺乏有效的治療措施，為了尋找新的胃癌生物標記物及有效的治療靶點，在分子層面探索胃癌的發(fā)病機制非常重要。近年來，長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在胃癌中的作用受到廣泛關(guān)注。本研究主要研究lncRNA基因表達譜在胃黏膜炎癥惡性轉(zhuǎn)變至胃癌過程中的變化，以及篩選出的lncRNA SOX21AS1對胃癌細胞生物學(xué)行為的影響和主要的作用機制。
　

2、　方法：
　　我們首先在安徽省立醫(yī)院內(nèi)鏡中心收集5例正常胃黏膜組織、5例萎縮胃炎伴腸上皮化生組織、5例進展期胃癌組織及5例癌旁組織，提取各組織總RNA進行l(wèi)ncRNA+mRNA人類基因芯片檢測，篩選出具有差異性表達的lncRNA，熒光定量PCR檢測篩選出的lncRNA SOX21AS1在各組織中的表達情況。然后合成過表達 SOX21AS1的慢病毒載體轉(zhuǎn)染胃癌細胞 AGS和 BGC823，構(gòu)建穩(wěn)定過表達SOX21AS1的細胞株。運用

3、流式細胞技術(shù)研究分析過表達SOX21AS1的胃癌細胞株細胞周期及凋亡的變化；劃痕實驗及Transwell實驗判斷過表達SOX21AS1對胃癌細胞遷移能力的影響；以及通過體內(nèi)異種移植 BALB/c裸鼠模型判斷過表達SOX21AS1對腫瘤生長的影響。最后通過熒光定量PCR和Western bolt實驗探索SOX21AS1可能的作用機制。
　　結(jié)果：
　　通過高通量基因芯片分析技術(shù)，以倍數(shù)變化FC>2且校正后P<0.05為標準，我

4、們篩選出176個lncRNA和215個mRNA在萎縮性胃炎組織異常表達，1428個lncRNA和3035個mRNA在胃癌組織中異常表達。在胃黏膜炎癥惡性轉(zhuǎn)變過程中均有變化的lncRNA有11個，包括p33715，p29027（H19），p7811，p6625（MIR22GH），p1457，p8725（CTD-3064h18.6），p38190-v4，p4300，p43909-v4，p36288-v4，p38901-v4。本研究選擇 p4

5、300即 SOX21AS1作為研究對象，通過熒光定量PCR檢測各組織中SOX21AS1的表達，發(fā)現(xiàn)從正常胃黏膜、萎縮性胃炎到胃癌組織中其表達逐漸下調(diào)。同時通過成功構(gòu)建穩(wěn)定過表達SOX21AS1細胞株，體外實驗證明了SOX21AS1過表達可以使AGS胃癌細胞周期阻滯于G0/G1期，抑制DNA合成，使細胞分裂增殖減弱，促進胃癌細胞凋亡，抑制胃癌細胞遷移。體內(nèi)異種移植裸鼠實驗顯示，過表達 SOX21AS1可以使裸鼠體內(nèi)腫瘤生長緩慢（P<0.0

6、01），抑制胃癌細胞成瘤性，過表達SOX21AS1瘤體的質(zhì)量（0.16±0.05g）明顯低于空白對照（0.91±0.35g）與陰性對照組（0.90±0.30g）。此外，熒光定量PCR結(jié)果顯示，SOX21基因的表達與lncRNA SOX21AS1表達明顯正相關(guān)（P<0.01），Western bolt結(jié)果顯示正常胃黏膜組織經(jīng)萎縮性胃炎發(fā)展到胃癌過程中SOX21蛋白表達量逐漸下調(diào)，CDX2在此過程中逐漸上調(diào)。同時，在細胞水平檢測結(jié)果證明，過

7、表達SOX21AS1的胃癌細胞株中SOX21蛋白表達升高，而CDX2蛋白表達量下降。
　　結(jié)論：
　　lncRNA SOX21AS1作為一個新的潛在的抑癌基因在胃黏膜炎癥惡性轉(zhuǎn)變過程發(fā)揮重要的作用，它可以通過調(diào)節(jié)SOX21-CDX2通路促進胃癌細胞凋亡、抑制胃癌細胞增殖和遷移，同時可以抑制異種移植裸鼠模型體內(nèi)腫瘤的生長。在理論上進一步完善lncRNA腫瘤調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，在臨床應(yīng)用方面，為尋找到新的胃癌生物標記物及治療靶點提供參考。