長鏈非編碼RNA H19在胃癌中作用及調(diào)控機制的研究.pdf

1、背景：
　　胃癌是最常見的消化道腫瘤，發(fā)病率高，預后差。長鏈非編碼RNA（lncRNA）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著極其重要的作用。課題前期研究發(fā)現(xiàn)lncRNA H19在胃癌組織中高表達，來源于H19第一個外顯子的miR-675在胃癌組織中表達與H19一致，兩者呈正相關(guān)。
　　方法：
　　本課題對74對胃癌組織H19和miR-675表達水平進行定量real-time PCR分析，收集患者各項臨床病理資料并隨訪患者生存期（隨

2、訪9-53個月，中位27個月），進行相關(guān)性分析；分別構(gòu)建H19和miR-675在MKN45細胞株敲低表達模型MKN45(KD)和SGC-7901細胞株的過表達模型SGC-7901(OE)，運用CCK8細胞增殖、Transwell遷移、侵襲、劃痕愈合等細胞學實驗以及裸鼠動物實驗研究H19和miR-675對于細胞生物學行為的影響；對表達譜芯片中差異基因進行篩選，結(jié)合KEGG數(shù)據(jù)庫和基因功能數(shù)據(jù)庫分析，構(gòu)建H19共表達網(wǎng)絡(luò)，運用RNA結(jié)合蛋白

3、免疫共沉淀（RIP）技術(shù)和雙熒光素酶報告基因（DLR）系統(tǒng)結(jié)合Western免疫印跡和免疫組化，研究H19和miR-675的調(diào)控機制。
　　結(jié)果：
　　通過對74例胃癌手術(shù)患者的隨訪，結(jié)合臨床病理資料分析,發(fā)現(xiàn)H19和miR-675在胃癌組織中表達顯著升高，且H19表達水平是影響胃癌患者預后的因素之一。高表達與低表達患者的總生存期（OS）的差異有顯著的統(tǒng)計學意義（p=0.036）；對MKN45（KD）模型和SGC7901（O

4、E）模型的細胞學及動物實驗顯示，過表達H19和miR-675可以顯著增強細胞的增殖、遷移、侵襲以及成瘤能力；相反地，敲低H19和miR-675的表達，細胞的增殖、遷移、侵襲以及成瘤能力顯著減弱。根據(jù)H19基因共表達網(wǎng)絡(luò)，將可能與H19存在相互作用的候選基因，通過RIP實驗發(fā)現(xiàn)ISM1是與H19相互作用的靶基因,H19與ISM1的表達呈正相關(guān)；DLR實驗發(fā)現(xiàn)CALN1是miR-675的靶基因，miR-675與CALN1的表達呈負相關(guān)。

5、r>　　結(jié)論：
　　H19在胃癌組織中表達較正常組織顯著升高，單因素分析顯示H19是影響胃癌患者預后的因素之一；過表達H19可以顯著增強胃癌細胞的增殖、遷移、侵襲、成瘤以及轉(zhuǎn)移等惡性生物行為；H19和miR-675的表達一致，呈正相關(guān)，但是兩者的生物學功能并不吻合，H19的功能不僅僅是作為miR-675的前體通過miR-675發(fā)揮作用。ISM1是H19的靶基因；CALN1是miR-675的靶基因。H19和miR-675在胃癌發(fā)生發(fā)