三元復(fù)合因子Net在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中調(diào)節(jié)作用的初步研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文三元復(fù)合因子在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中調(diào)節(jié)作用的初步研究姓名：李百文申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系病）指導(dǎo)教師：諸琦20090401上海交通上學(xué)醫(yī)學(xué)院博士畢業(yè)論文搐要細胞增殖的確切機制。(3)構(gòu)建野生型P53真核表達質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染到過表達Net基因的穩(wěn)定細胞克隆BxPC3Net中，以血清和UV激活MAPKs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，觀察野生型P53基因?qū)et基因磷酸化的影響。結(jié)果(1)mRNA及蛋白檢測結(jié)果一致表明，Net在胰

2、腺癌組織中普遍低表達，而在癌周正常組織中則呈高表達，相對定量后對比分析差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(PO01)，而cfos的表達正好與之相反，其在癌組織中呈明顯的高表達，在癌周正常組織中則呈低表達，差異亦有顯著性意義(P001)；相似的檢測結(jié)果同樣見于胰腺癌細胞系。Net及c—fos蛋白的表達進一步經(jīng)等級相關(guān)分析，結(jié)果提示在腫瘤組織中二者表達呈有明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)F093，P001)。(2)PCR產(chǎn)物電泳后可見長度為1224bp左右的

3、目的條帶；酶切及測序鑒定表明pEGFPN1質(zhì)粒中插入了Net的DNA片斷；PCR、免疫熒光及Westernblot檢測表明，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后Net基因成功表達，同時抑制了cfos基因的表達。(3)MTT檢測顯示穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的胰腺癌細胞BxPC3Net生長緩慢，第七天細胞增殖抑制率為5692％，明顯高于BxPC3Vector對照組86％(PO01)；軟瓊脂克隆形成實驗發(fā)現(xiàn)BxPC3一Net細胞克隆形成明顯減低；細胞周期分析提示Net轉(zhuǎn)染抑制了細胞周