L-PGDS與內(nèi)脂素在人股動脈粥樣硬化斑塊組織中的表達及意義.pdf

1、研究背景與目的：
　　外周動脈疾?。≒eripheral arterial disease,PAD）中，下肢動脈粥樣硬化閉塞性疾?。╨ower extremity atherosclerotic disease, LEAD）被認為是除冠狀動脈及腦血管系統(tǒng)外的外周大動脈閉塞而導(dǎo)致的疾病過程，最常見的原因就是動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）?，F(xiàn)如今隨著社會經(jīng)濟和人民生活水平的不斷提高，伴隨著人口的不斷老齡化、工作及

2、生活壓力的增大、吸煙及大量富含脂肪及膽固醇食物的攝入等各種生活習(xí)慣的改變，致使動脈粥樣硬化的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢。LEAD是指由于下肢動脈發(fā)生粥樣硬化導(dǎo)致的下肢動脈狹窄甚至是閉塞，下肢動脈供血不足或中斷而出現(xiàn)的下肢組織慢性或急性缺血癥狀的疾病，是周圍動脈疾病的重要組成部分。隨著病情的進展可轉(zhuǎn)變?yōu)殚]塞性動脈硬化癥，其具有發(fā)病率高、致殘率高、治愈率低等特點。高血壓、糖尿病往往也是此病的促發(fā)因素。目前國內(nèi)外關(guān)于下肢動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)病機

3、制主要有炎癥學(xué)說、脂質(zhì)浸潤學(xué)說、血管中膜平滑肌細胞激活及內(nèi)膜損傷理論、血小板聚集和血栓形成學(xué)說等，其中脂質(zhì)浸潤及炎癥學(xué)說備受關(guān)注。目前，對于下肢動脈粥樣硬化的治療方法主要有藥物保守治療，手術(shù)治療，干細胞移植治療并同時控制血糖及血壓等原發(fā)性疾病。通過積極采取上述治療方式，通?？刹煌潭鹊母纳苹颊呦轮毖陌Y狀，但是其遠期治療效果及復(fù)發(fā)率仍較高。所以深入研究動脈粥樣硬化的發(fā)病機制，延緩動脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展，以求更有效的進行預(yù)防下肢動脈粥

4、樣硬化閉塞癥的發(fā)生以及更早期診斷及制定更為有效、科學(xué)的治療方法，減少患者痛苦，提高患者的日后生活質(zhì)量，成為目前廣受關(guān)注的問題。
　　越來越多的研究表明脂肪組織與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系，脂肪組織能否分泌多種脂肪因子，其中內(nèi)脂素（Visfatin）是一種重要的脂肪細胞因子，其能促進基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)等合成，并提高其生物活性，對動脈粥樣硬化有重要的促進作用，與

5、心腦血管疾病及周圍血管疾病有著密切關(guān)系。脂質(zhì)運載型前列腺D合成酶（1ipocalintype prostaglandin Dsynthase，L-PGDS）是脂質(zhì)運載蛋白超家族的成員，目前體液中有關(guān) L-PGDS的定量研究顯示，哺乳動物 L-PGDS的含量在腦脊液、精液含量最高，其次為尿液、血漿。其主要作用有催化前列腺素H2（PGH2）轉(zhuǎn)變成前列腺素 D2（PGD2）的作用，PGD2具有抑制炎性細胞和炎性因子黏附及抑制血小板聚集從而起到

6、抗血栓形成的作用。有相關(guān)研究也初步表明 L-PGDS具有間接拮抗COX的作用，間接起到抗動脈粥樣硬化的作用。本實驗采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶連反應(yīng)（Real-time PCR）和免疫組織化學(xué)法觀察人股AS斑塊中內(nèi)脂素及L-PGDS的表達及二者的相關(guān)性，探討其表達水平的變化與人股AS及斑塊穩(wěn)定性之間的關(guān)系，旨在為臨床預(yù)防和治療外周動脈粥樣硬化性疾病提供新的治療靶點。
　　材料及方法：
　　1.收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院血管外科2012年

7、4月至2014年7月股AS斑塊剝脫術(shù)中獲取的內(nèi)膜標(biāo)本32例，男21例，女11例，年齡34～72歲，平均（53.37±11.81）歲。15例普外科手術(shù)切除的脾動脈及腸系膜動脈標(biāo)本（對照組），男11例，女4例，年齡36～75歲，平均（49.36±11.01）歲。對照組術(shù)前均排除患有癥狀性 AS、近期腦卒中（病史<3個月）；近期急性心肌梗死（病史<3個月）；感染，糖尿病、心腦血管疾病、肝、腎腫瘤等慢性疾病及傳染病，甲狀腺功能亢進及減低；近期服

8、用降糖、調(diào)脂及降壓藥物者。并確保所取標(biāo)本動脈壁三層結(jié)構(gòu)的完整性。每位受試患者均被告知其科研用途并簽訂知情同意書。術(shù)中獲取標(biāo)本去除周圍組織后立即液氮保存?zhèn)錂z。
　　2.所取標(biāo)本進行HE染色，按病理分類標(biāo)準(zhǔn)將股動脈粥樣硬化斑塊分為兩組：穩(wěn)定斑塊組（18例）、不穩(wěn)定斑塊組（14例）。15例外科手術(shù)切除的脾動脈、腸系膜動脈標(biāo)本作為對照組。
　　3.利用免疫組織化學(xué)法測定股動脈粥樣硬化斑塊組與對照組中內(nèi)脂素與L-PGDS蛋白的表達情況

9、，分析內(nèi)脂素與L-PGDS蛋白表達的變化與股動脈粥樣硬化之間的關(guān)系，并觀察兩種蛋白之間是否有相關(guān)性。
　　4.利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶連反應(yīng)（Reverse Transcription-PCR）檢測股AS斑塊組織和正常動脈組織中內(nèi)脂素、L-PGDS mRNA的表達，從基因?qū)用娣治鰞烧適RNA表達的變化與動脈粥樣硬化的意義，并分析兩者之間的關(guān)系。
　　5.統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS17.0進行分析，股動脈粥樣硬化斑塊2組及對照組內(nèi)脂素和

10、L-PGDS蛋白和mRNA表達的比較應(yīng)用單因素方差分析和LSD-T法檢驗，應(yīng)用Spearson相關(guān)分析內(nèi)脂素和L-PGDS蛋白及mRNA表達的關(guān)系，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　一．免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：
　　1.內(nèi)脂素蛋白在股動脈粥樣硬化斑塊組中均有較高表達，于對照組中低表達。動脈粥樣硬化板塊中內(nèi)脂素蛋白棕褐色顆粒表達陽性區(qū)主要集中在炎性細胞浸潤區(qū)域，且多集中于細胞質(zhì)中。內(nèi)脂素蛋白表達量不穩(wěn)定斑塊組明顯高于

11、對照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑塊組內(nèi)脂素蛋白表達量也明顯高于對照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯高于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中內(nèi)脂素蛋白表達量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=76.586，P<0.01）。
　　2.L-PGDS蛋白于動脈粥樣硬化斑塊組低表達，于對照組表達較高。L-PGDS蛋白棕褐色顆粒主要表達于動脈內(nèi)膜區(qū)及斑塊炎性細胞浸潤區(qū)。L-PGDS蛋白表達量于穩(wěn)定斑塊組明顯低于對照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組L-P

12、GDS蛋白表達量也明顯低于對照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯低于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中L-PGDS蛋白表達量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=17.439，P<0.01）。
　　3.應(yīng)用Spearson相關(guān)性分析觀察股AS斑塊中內(nèi)脂素與L-PGDSD蛋白表達的相關(guān)性，穩(wěn)定斑塊組中內(nèi)脂素和 L-PGDS蛋白表達呈負相關(guān)（r=-0.664，P=0.003），不穩(wěn)定斑塊組中內(nèi)脂素和L-PGDS蛋白表達呈負相關(guān)（r=-0.534

13、，P=0.049）。
　　二．RT-PCR結(jié)果：
　　1.內(nèi)脂素 mRNA表達量于不穩(wěn)定斑塊組明顯高于對照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑塊組內(nèi)脂素mRNA表達量也明顯高于對照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯高于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中內(nèi)脂素mRNA表達量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=22.977，P<0.01）。
　　2.L-PGDS mRNA表達量于不穩(wěn)定斑塊組明顯低于穩(wěn)定斑塊組及對照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑

14、塊組L-PGDS蛋白表達量也明顯低于對照組（P<0.01）；三組中L-PGDS蛋白表達量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=25.388，P<0.01）。
　　3.應(yīng)用Spearson相關(guān)性分析顯示，穩(wěn)定動脈硬化斑塊組中內(nèi)脂素和L-PGDS mRNA表達呈負相關(guān)（r=-0.505，P=0.021），在不穩(wěn)定動脈硬化組中內(nèi)脂素和L-PGDS mRNA表達呈負相關(guān)（r=-0.609，P=0.021）。
　　結(jié)論：
　　1.內(nèi)脂素和L-