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文檔簡介
1、隨著現在生物能源產業(yè)轉入非糧時代,纖維素、半纖維素利用問題是解決原料成本上的一個技術難題,纖維素預處理以及水解產物中木糖等五碳糖的利用問題是其中的關鍵,利用分子生物學技術手段,拓展傳統油脂微生物的木糖利用效率,以最終實現木質纖維素為原料發(fā)酵生產微生物油脂,是隨著生物柴油技術成熟推廣應用而備受關注的問題。
本課題主要研究了產油酵母—粘紅酵母木糖利用過程中介導五碳糖特異性跨膜轉運的機理研究。首先,本文考察了已報道的假絲酵母木糖
2、特異性跨膜轉運蛋白在粘紅酵母中的表達,實驗中首先構建了適用于粘紅酵母外源基因表達用的質粒載體,在原有質?;A上添加了適用于粘紅酵母基因工程篩選用的博來霉素抗性基因(shble),同時添加了適用于粘紅酵母表達外源基因的多克隆位點,構建了粘紅酵母游離型表達載體PRS424-Phxt7-GFP-Thxt7-shble,對于粘紅酵母后期整個分子生物學的研究具有很強的應用價值。
在構建好的載體PRS424-Phxt7-GFP-Thx
3、t7-shble上成功的連接了已報道的假絲酵母木糖特異性跨膜轉運基因GXS1(GlucoseXylose Symporter),通過對原始菌與重組菌木糖發(fā)酵過程中對木糖濃度的測定,發(fā)現重組菌對木糖的吸收利用效率高于原始菌,重組菌在發(fā)酵80小時左右木糖消耗完,同比原始菌則需要在120h左右才能將木糖利用完。說明重組菌中表達的木糖跨膜轉運蛋白能夠有效地介導木糖的胞外到胞內的運輸。
本文嘗試憑借反轉錄PCR技術,染色體步移技術,
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