異硫氰酸苯乙酯對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用及其相關(guān)分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的:對(duì)異硫氰酸苯乙酯(phenthyl isothiocyanate，PEITC)中藥單體作用于人胃癌823細(xì)胞的體外抑制情況以及其相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法:①采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法來檢測(cè)異硫氰酸苯乙酯人胃癌BGC-823細(xì)胞株增殖影響情況;②采用流式細(xì)胞儀聯(lián)合AnnexinⅤ/PI雙染法檢測(cè)異硫氰酸苯乙酯作用于人胃癌BGC-823細(xì)胞株24h后對(duì)該細(xì)胞凋亡的影響;③采用Transwell實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)異硫氰酸苯乙酯對(duì)82

2、3細(xì)胞侵襲能力是否有作用;④采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)方法來驗(yàn)證異硫氰酸苯乙酯是否具有抑制人胃癌細(xì)胞BGC-823遷移的能力、采用細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)異硫氰酸苯乙酯對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823粘附能力的影響;⑤采用real time-PCR、Western Bolt兩種方法聯(lián)合進(jìn)行異硫氰酸苯乙酯誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(caspase-3、caspase-9、PARP、Bcl-2、Bax、Bcl-xl、Survivin)的檢測(cè)以及侵襲粘附相關(guān)基因(MM

3、P-2、MMP-9、MMP-14、RECK、E-cad)的表達(dá)改變情況。
　　結(jié)果:①異硫氰酸苯乙酯在作用人胃癌BGC-823細(xì)胞24h后，與空白組比較，可以明顯的對(duì)該胃癌細(xì)胞的增殖起到抑制的效果，并且給藥濃度越高效果越佳;②AnnexinⅤ/PI雙染法結(jié)果表明了異硫氰酸苯乙酯能誘導(dǎo)人胃癌BGC-823細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象，13.5uM的給藥濃度時(shí)對(duì)BGC-823胃癌細(xì)胞抑制率為12.8％，在濃度為24uM時(shí)抑制率高達(dá)88.3％，說明

4、抑制作用是呈濃度依賴關(guān)系;③real time-PCR、Western Bolt也均證明異硫氰酸苯乙酯對(duì)Bcl-2、Bcl-xl、Survivin三種基因起下調(diào)作用，而對(duì)Bax則是相反的上調(diào)，另外可激活caspase-3、caspase-9、PARP的活性;④異硫氰酸苯乙酯作用于人胃癌細(xì)胞BGC-823細(xì)胞24h后，抑制該細(xì)胞侵襲能力開始顯現(xiàn)，在濃度為13.5μM和18μM時(shí)，觀察到侵襲的細(xì)胞數(shù)量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對(duì)照組，其抑制率達(dá)到20.8％

5、±0.75％和67.25％±3.61％，且呈濃度依賴關(guān)系;⑤劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，異硫氰酸苯乙酯可以有效的抑制BGC-823細(xì)胞的遷移能力，而粘附實(shí)驗(yàn)很好的證明了異硫氰酸苯乙酯對(duì)BGC-823細(xì)胞的粘附抑制率是隨時(shí)間而增長(zhǎng)的;⑥r(nóng)eal time-PCR、Western Bolt實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果表示RECK的表達(dá)與濃度呈正相關(guān)，而MMPs家族的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:異硫氰酸苯乙酯抑制人胃癌細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡作用顯著，該中藥單體是通過一