竹節(jié)香附素A對胃癌細(xì)胞的抑制作用及其相關(guān)分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的:研究竹節(jié)香附素A對人胃癌細(xì)胞的抑制作用及其相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法:應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)法（MTT法）檢測竹節(jié)香附素上A對高(MKN-28)、中(SGC-7901)、低(BGC-823)三種分化的人胃癌細(xì)胞株增殖的影響;應(yīng)用流式細(xì)胞儀聯(lián)合AnnexinⅤ/PI雙染法檢測竹節(jié)香附素A對高(MKN-28)、中(SGC-7901)、低(BGC-823)三種分化的人胃癌細(xì)胞株凋亡的影響;應(yīng)用Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)檢測竹節(jié)香附素

2、A對人胃癌細(xì)胞BGC-823侵襲能力的影響;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測竹節(jié)香附素A對人胃癌細(xì)胞BGC-823遷移能力的影響、應(yīng)用基質(zhì)-細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測竹節(jié)香附素A對人胃癌細(xì)胞BGC-823粘附能力的影響;應(yīng)用real time-PCR、Western Bolt檢測竹節(jié)香附素A誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(caspase-3、caspase-8、caspase-9、PARP, Bcl-2、Bcl-xl、Survivin)以及侵襲粘附相關(guān)基因(MMP

3、-2、MMP-9、MMP-14、RECK、E-cad)的表達(dá)改變情況。
　　結(jié)果:竹節(jié)香附素A在對三種胃癌細(xì)胞給藥12h后，與空白組相比，能顯著抑制三種胃癌細(xì)胞的增殖，且這種抑制成濃度依賴關(guān)系;AnnexinⅤ/PI雙染法結(jié)果顯示竹節(jié)香附素A能誘導(dǎo)三種胃癌細(xì)胞的凋亡，在濃度為16μM時其對MKN-28、SGC-7901、BGC-823三株胃癌細(xì)胞抑制率分別達(dá)到95.47％、34.01％、82.16％，且呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系，real

4、time-PCR以及Western Bolt實(shí)驗(yàn)證明竹節(jié)香附素A能上調(diào)Bax表達(dá)，下調(diào)Bcl-2、Bcl-xl、Survivin表達(dá)，激活caspase-3、caspase-8、caspase-9、PARP的活性，且這種表達(dá)呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系。竹節(jié)香附素A在對人胃癌細(xì)胞BGC-823給藥24h后發(fā)現(xiàn)，與對照組相相比，其能顯著抑制BGC-823細(xì)胞的侵襲能力，在濃度為8μM以及16μM時，鏡下顯示侵襲過去的細(xì)胞數(shù)目均明顯低于對照組，其抑制率

5、達(dá)到43.66％±4，37％以及82.48％±1.37％，且呈濃度依賴關(guān)系，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，竹節(jié)香附素A對BGC-823的遷移能力有顯著抑制，并且呈現(xiàn)出濃度依賴關(guān)系，而基質(zhì)-細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)證明竹節(jié)香附素A對BGC-823的粘附抑制率表現(xiàn)出時間濃度依賴性，real time-PCR以及Western Bolt實(shí)驗(yàn)顯示RECK、E-cad的表達(dá)隨著藥物濃度的增加而上升，MMP-2、MMP-9、MMP-14、Rhoc、 p-STAT3表達(dá)隨著

6、藥物濃度的上升而下降。
　　結(jié)論:竹節(jié)香附素A能有效抑制人胃癌細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡，其機(jī)制可能是通過激活caspase家族蛋白酶活性以及上調(diào)Bax表達(dá)，下調(diào)Bcl-2、Bcl-xL、Survivin表達(dá)從而誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡。竹節(jié)香附素A對胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移具有抑制作用，其機(jī)制可能與其上調(diào)RECK、E-cad蛋白的表達(dá)，下調(diào)MMP-2、MMP-9、MMP-14、Rhoc蛋白的表達(dá)有關(guān)，另一方面，竹節(jié)香附素A能夠抑制STAT3信號