COPD理論探討及參芪補(bǔ)肺湯含藥血清抑制COPD肺氣虛證氣道平滑肌細(xì)胞增殖的分子機(jī)理.pdf

1、目的:1.整理研究古代醫(yī)家對(duì)COPD認(rèn)識(shí)和張葵主任治療COPD肺氣虛證的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)。
　　2.探求參芪補(bǔ)肺湯抑制COPD肺氣虛證氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)增殖的分子機(jī)理。
　　方法:1.通過(guò)閱讀經(jīng)典著作及相關(guān)古籍文獻(xiàn)，查閱導(dǎo)師論文著作文稿、歷屆研究生論文以及拜訪請(qǐng)教老師，接受言傳身授，跟師隨診、實(shí)時(shí)采集病歷、整理病歷等方式收集整理資料。
　　2.把SD大鼠隨機(jī)分為空白組和COPD肺氣虛證模型組（采用香煙煙熏復(fù)合氣管

2、注射脂多糖方式造模）。無(wú)菌取空白組和COPD肺氣虛證模型組的SD大鼠氣道平滑肌組織進(jìn)行消化后進(jìn)行原代培養(yǎng)，將培養(yǎng)的細(xì)胞分為空白組（空白組大鼠氣道平滑肌組織經(jīng)原代培養(yǎng)細(xì)胞）、模型組、中藥低劑量組、高劑量組以及氨茶堿組（后四組細(xì)胞為COPD肺氣虛證模型大鼠氣道平滑肌組織消化細(xì)胞），共5個(gè)組?？瞻捉M不予處理;模型組加入香煙提取物(CSE)及正常組血清;中藥低劑量組中加入CSE及中藥低劑量組含藥血清;中藥高劑量組中加入CSE及中藥高劑量組含藥血

3、清;氨茶堿組中加入CSE及氨茶堿。采用增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測(cè)大鼠ASMCs增殖;用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)大鼠ASMCs增殖活性;用免疫組化和Western blot法檢測(cè)各組ASMCs中HDAC2、乙?；M蛋白H4以及NF-KBp65蛋白的表達(dá);用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)各組ASMCs中HDAC2mRNA以及NF-kBp65mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.導(dǎo)師對(duì)COPD肺氣虛證病機(jī)的認(rèn)識(shí)為肺、脾、

4、腎三臟虧虛兼夾有痰阻血瘀，其經(jīng)驗(yàn)方參芪補(bǔ)肺湯具有益氣補(bǔ)肺活血化痰的功效，對(duì)COPD肺氣虛證患者有良好療效。
　　2.MTT檢測(cè)結(jié)果提示:與空白組比較，模型組的ASMCs增殖活性均明顯增高，顯著差異（P＜0.05）;與模型組相比，中藥低劑量組的ASMCs增殖活性無(wú)明顯差異(P＞0.05)，中藥高劑量組和氨茶堿組的ASMCs增殖活性明顯下降，顯著差異（P＜0.05）。
　　3.免疫組化結(jié)果為:與空白組比較，模型組乙酰化組蛋白H4

5、、NF-κ Bp65、PCAN的蛋白表達(dá)明顯升高，HDAC2的蛋白表達(dá)明顯降低，均有顯著差異（P＜0.05）;與模型組比較，中藥低劑量組中HDAC2、乙酰化組蛋白H4、NF-κ Bp65以及PCNA的蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異（P＞0.05）;中藥高劑量組中HDAC2的蛋白表達(dá)明顯增高，乙?；M蛋白H4、NF-κBp65以及PCNA的蛋白表達(dá)明顯降低，均有顯著差異（P＜0.05）;氨茶堿組中HDAC2的蛋白表達(dá)明顯增高，NF-κ Bp65、PC

6、NA的蛋白表達(dá)明顯降低，均有顯著差異（P＜0.05），乙?；M蛋白H4的蛋白表達(dá)無(wú)顯著變化（P＞0.05）。
　　4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果提示:與空白組比較，模型組NF-κ Bp65mRNA表達(dá)均明顯增高，HDAC2mRNA的表達(dá)明顯降低，有顯著差異（P＜0.05）。與模型組比較，中藥低劑量組NF-κ Bp65mRNA的表達(dá)和HDAC2mRNA的表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）;中藥高劑量組HDAC2mRNA的表達(dá)明顯增高，NF-

7、κ Bp65mRNA的表達(dá)明顯降低，有顯著差異（P＜0.05）;氨茶堿組HDAC2mRNA的表達(dá)明顯增高，NF-κ Bp65mRNA的表達(dá)均明顯降低，有顯著差異（P＜0.05）。
　　5.Western-blot結(jié)果:與空白組比較，模型組乙?；M蛋白H4的蛋白表達(dá)和NF-κ Bp65的蛋白表達(dá)均明顯增高，HDAC2的蛋白表達(dá)明顯降低，均有顯著差異（P＜0.05）。與模型組比較，中藥低劑量組乙酰化組蛋白H4的蛋白表達(dá)、NF-κ Bp

8、65的蛋白表達(dá)和HDAC2的蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）;中藥高劑量組HDAC2的蛋白表達(dá)均明顯增高，乙酰化組蛋白H4的蛋白表達(dá)和NF-κBp65的蛋白表達(dá)均明顯降低，均有顯著差異（P＜0.05）;氨茶堿組HDAC2的蛋白表達(dá)明顯增高，NF-κBp65的蛋白表達(dá)均明顯降低，均有顯著差異（P＜0.05），乙?；M蛋白H4的蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:1.導(dǎo)師注重中醫(yī)傳統(tǒng)，重視益氣補(bǔ)肺活血化痰，組方的參芪補(bǔ)肺

9、湯臨床療效好，實(shí)用性強(qiáng)值得推廣。
　　2.通過(guò)PCNA及MTT的檢測(cè)結(jié)果證實(shí)COPD肺氣虛證模型大鼠離體培養(yǎng)的ASMCs經(jīng)CSE刺激后存在異常增殖。
　　3.模型組大鼠ASMCs增殖中乙?；M蛋白H4和NF-κBp65的表達(dá)增高，HDAC2的表達(dá)減少，證實(shí)了乙?；M蛋白H4、HDAC2以及NF-κBp65參與了COPD肺氣虛證大鼠ASMCs增殖。
　　4.參芪補(bǔ)肺湯含藥血清能抑制COPD肺氣虛證模型大鼠ASMCs增殖，