ASK1在損傷的大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞增生中的作用研究.pdf

1、目的：探討細胞凋亡信號調(diào)節(jié)蛋白1（apoptosis signal regulating kinase1, ASK1）在損傷的大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞增生中的作用。
　　方法：由原代培養(yǎng)得到高純度(>98％)的大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞，建立星形膠質(zhì)細胞損傷模型。星形膠質(zhì)細胞損傷模型建立后立即給予生理鹽水（損傷模型組）、ASK1特異性抗體（Anti-ASK1 antibody組）、ASK1特異性抑制劑（Thioredoxin，Trx組）處理

2、，對照組為原代培養(yǎng)的大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞，不作任何處理。
　　損傷處理后1h、6 h、12 h、24 h、72h應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測星形膠質(zhì)細胞標志蛋白膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）和波形蛋白(Vimentin，Vim)的表達情況，應(yīng)用CCK-8技術(shù)檢測星形膠質(zhì)細胞的增殖活性，損傷處理后12h、24h、72 h應(yīng)用免疫熒光標記技術(shù)檢測星形膠質(zhì)細胞劃痕寬度的變化。

3、r>　　結(jié)果：損傷處理后24h及72h損傷模型組GFAP和Vim的表達均顯著高于對照組、Anti-ASK1 antibody組、Trx組（P<0.01）；損傷處理后24h及72h損傷模型組星形膠質(zhì)細胞的劃痕平均寬度明顯小于對照組、Anti-ASK1 antibody組和Trx組（P<0.01）；損傷處理后12h、24h、72h對照組、Anti-ASK1 antibody組和Trx組星形膠質(zhì)細胞增殖活性明顯低于損傷模型組（P<0.05）。