PCDH10通過下調(diào)Wnt-β-catenin信號通路抑制多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖及其機(jī)制.pdf

1、目的:探討PCDH10是否通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號通路抑制MM細(xì)胞增殖及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法:采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將空載體pcDNA3.1(+)TP53質(zhì)粒和pcDNA3.1(+)PCDH10質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至RPMI8226、KM3細(xì)胞。實驗分為對照組、空載體組、轉(zhuǎn)染組。采用RT-PCR和Western blot檢測三組細(xì)胞PCDH10表達(dá)。RT-PCR檢測不同濃度（0、5、10、15及20μM/ml）的Licl處理48

2、h后細(xì)胞內(nèi)β-catenin的表達(dá)，選取最佳濃度Licl分別作用于各組細(xì)胞；應(yīng)用CCK-8檢測細(xì)胞增殖能力；流式檢測細(xì)胞周期；質(zhì)粒雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)分析PCDH10對LEF/TCF活性的影響；實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測β-catenin、c-Myc、Cyclind1、BCL-9基因mRNA表達(dá)水平；Western blot檢測β-catenin、c-Myc、Cyclind1、GSK-3β、pGSK-3β、AKT總蛋

3、白水平及細(xì)胞核內(nèi)β-catenin、BCL-9蛋白表達(dá)；免疫熒光觀察PCDH10對β-catenin核轉(zhuǎn)位的影響。
　　結(jié)果:
　?、貾CDH10基因轉(zhuǎn)染后在RPMI8226、KM3細(xì)胞中獲得穩(wěn)定表達(dá)；
　?、贑CK-8結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖能力顯著受抑(P<0.05)；
　?、哿魇浇Y(jié)果顯示PCDH10將細(xì)胞周期阻滯于G1期(P<0.05)；
　　④熒光素酶活性分析顯示PCDH10顯著抑制LEF/TCF基因

4、活性(P<0.05)；
　?、輖RT-PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中c-Myc、Cyclind1、BCL-9 mRNA水平下降(P<0.05)，β-catenin mRNA水平無明顯下降(P>0.05)；
　?、轜estern blot結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中β-catenin、c-Myc、Cyclind1、pGSK-3β、AKT總蛋白表達(dá)降低，而GSK-3β蛋白表達(dá)增加，同時細(xì)胞核內(nèi)β-catenin、BCL-9蛋白表達(dá)明顯下調(diào)

5、；
　?、呙庖邿晒庥^察到轉(zhuǎn)染組細(xì)胞β-catenin熒光強(qiáng)度減弱，核內(nèi)分布減少；
　　⑧RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)20μM/ml的Licl為KM3細(xì)胞最佳作用濃度，RPMI8226細(xì)胞的最佳作用濃度為15μM/ml；
　?、峤?jīng)Licl處理后，與對照組、空載體組比較，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖能力及β-catenin、c-Myc、Cyclind1、pGSK-3β蛋白表達(dá)仍受到抑制(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　?、貾CDH1

6、0能將細(xì)胞周期阻滯于G1期，降低MM細(xì)胞增殖能力；
　　②PCDH10通過下調(diào)Wnt/β-catenin信號通路抑制MM細(xì)胞增殖；
　　③PCDH10下調(diào)Wnt/β-catenin信號通路的機(jī)制與抑制LEF/TCF活性及其輔助因子BCL-9的表達(dá)有關(guān)；
　?、躊CDH10可通過下調(diào)AKT的表達(dá)增加GSK-3β蛋白水平，減少胞漿游離β-catenin，抑制β-catenin入核，進(jìn)一步降低Wnt/β-catenin通路活