PCDH10通過下調Wnt-β-catenin信號通路抑制多發(fā)性骨髓瘤細胞增殖及其機制.pdf

1、目的:探討PCDH10是否通過調控Wnt/β-catenin信號通路抑制MM細胞增殖及其相關機制。
　　方法:采用脂質體轉染法將空載體pcDNA3.1(+)TP53質粒和pcDNA3.1(+)PCDH10質粒分別轉染至RPMI8226、KM3細胞。實驗分為對照組、空載體組、轉染組。采用RT-PCR和Western blot檢測三組細胞PCDH10表達。RT-PCR檢測不同濃度（0、5、10、15及20μM/ml）的Licl處理48

2、h后細胞內β-catenin的表達，選取最佳濃度Licl分別作用于各組細胞；應用CCK-8檢測細胞增殖能力；流式檢測細胞周期；質粒雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)分析PCDH10對LEF/TCF活性的影響；實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測β-catenin、c-Myc、Cyclind1、BCL-9基因mRNA表達水平；Western blot檢測β-catenin、c-Myc、Cyclind1、GSK-3β、pGSK-3β、AKT總蛋

3、白水平及細胞核內β-catenin、BCL-9蛋白表達；免疫熒光觀察PCDH10對β-catenin核轉位的影響。
　　結果:
　?、貾CDH10基因轉染后在RPMI8226、KM3細胞中獲得穩(wěn)定表達；
　?、贑CK-8結果發(fā)現(xiàn)轉染組細胞增殖能力顯著受抑(P<0.05)；
　?、哿魇浇Y果顯示PCDH10將細胞周期阻滯于G1期(P<0.05)；
　　④熒光素酶活性分析顯示PCDH10顯著抑制LEF/TCF基因

4、活性(P<0.05)；
　　⑤qRT-PCR結果顯示轉染組細胞中c-Myc、Cyclind1、BCL-9 mRNA水平下降(P<0.05)，β-catenin mRNA水平無明顯下降(P>0.05)；
　?、轜estern blot結果顯示，轉染組細胞中β-catenin、c-Myc、Cyclind1、pGSK-3β、AKT總蛋白表達降低，而GSK-3β蛋白表達增加，同時細胞核內β-catenin、BCL-9蛋白表達明顯下調

5、；
　?、呙庖邿晒庥^察到轉染組細胞β-catenin熒光強度減弱，核內分布減少；
　?、郣T-PCR檢測發(fā)現(xiàn)20μM/ml的Licl為KM3細胞最佳作用濃度，RPMI8226細胞的最佳作用濃度為15μM/ml；
　?、峤?jīng)Licl處理后，與對照組、空載體組比較，轉染組細胞增殖能力及β-catenin、c-Myc、Cyclind1、pGSK-3β蛋白表達仍受到抑制(P<0.05)。
　　結論:
　　①PCDH1

6、0能將細胞周期阻滯于G1期，降低MM細胞增殖能力；
　?、赑CDH10通過下調Wnt/β-catenin信號通路抑制MM細胞增殖；
　?、跴CDH10下調Wnt/β-catenin信號通路的機制與抑制LEF/TCF活性及其輔助因子BCL-9的表達有關；
　　④PCDH10可通過下調AKT的表達增加GSK-3β蛋白水平，減少胞漿游離β-catenin，抑制β-catenin入核，進一步降低Wnt/β-catenin通路活