PCDH10基因?qū)Χ喟l(fā)性骨髓瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：PCDH10（Protocadherin-10）基因?qū)儆谠}粘蛋白家族，位于4q28.3。PCDH10已被證實(shí)為一種抑癌基因，可能參與了抑制癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等過程從而發(fā)揮其抑癌功能。多發(fā)性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）是漿細(xì)胞克隆增殖性惡性疾病，PI3K/AKT通路的異常與有疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們前期的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCDH10基因能抑制MM生長，但其具體的作用機(jī)制尚未闡明。本實(shí)驗(yàn)將研究PCDH10基因?qū)

2、M細(xì)胞株增殖、遷移、侵襲的影響及機(jī)制。
　　方法：通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)PCDH10和pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入人骨髓瘤細(xì)胞株KM3和RPMI8226,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染組作為對照，采用RT-PCR和Westernblot檢測PCDH10在基因和蛋白層面的表達(dá)；MTT實(shí)驗(yàn)檢測PCDH10表達(dá)對細(xì)胞增殖的影響；應(yīng)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力；通過體

3、外小管形成實(shí)驗(yàn)觀察瘤細(xì)胞血管新生功能；通過Westernblot檢測相關(guān)蛋白，PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p70S6K、MMP-2、MMP-9、cyclinD1和VEGF的表達(dá)量。
　　結(jié)果：PCDH10基因轉(zhuǎn)染MM細(xì)胞后，PCDH10基因和蛋白的表達(dá)均明顯升高。MTT結(jié)果顯示，PCDH10明顯抑制瘤細(xì)胞增殖，(P<0.05)；Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陽性表達(dá)PCDH10基因的MM細(xì)胞侵襲和遷移能力均明顯下降

4、(P<0.05)；體外小管形成實(shí)驗(yàn)可見，PCDH10基因陽性表達(dá)組小管形成數(shù)明顯降低(P<0.05)，對照組未見明顯異常；Westernblot結(jié)果顯示PCDH10基因的表達(dá)能降低PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p70S6K、MMP-2、MMP-9、cyclinD1、和VEGF表達(dá)量(P<0.05)。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明PCDH10基因能抑制MM細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及血管新生能力，其機(jī)制可能是通過PI3K/AKT通路