PAX5通過結合RIP2調(diào)控多發(fā)性骨髓瘤細胞NF-kB信號通路.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤是一種惡性血液腫瘤，主要是B淋巴細胞惡性轉變?yōu)榉置趩我活愋兔庖咔虻鞍椎膼盒詽{細胞并伴隨骨質(zhì)破壞，腎衰竭，貧血等一系列癥狀。導致多發(fā)性骨髓瘤發(fā)病的原因有很多，外界致癌因素例如電離輻射，化學致癌物和病毒感染等通過誘導細胞染色體易位，表觀遺傳學變化和基因突變使B細胞基因組變的不穩(wěn)定，最終導致某些原癌基因的異常表達進而發(fā)生惡性轉化。研究者在對多發(fā)性骨髓瘤大量臨床病例的基因表達譜進行大規(guī)模統(tǒng)計學分析后發(fā)現(xiàn)，一部分病人體內(nèi)的惡性漿細胞出

2、現(xiàn)PAX5的大量表達。PAX5是一種B細胞特異性表達的核轉錄因子，它主要通過促進B淋巴細胞特異性基因（例如CD19，BLNK等）的轉錄，抑制非B系基因以及漿細胞分化必需基因（例如Notch1，XBP-1等）的表達來維持B細胞的特異性。PAX5在B淋巴細胞分化過程中的表達具有階段性，主要在原B細胞階段開啟轉錄，在成熟B細胞向漿細胞的終末分化過程中它的表達被迅速的關閉了，PAX5表達沉默是B細胞進行終末分化的必要條件之一。PAX5的高表達在

3、多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病以及治療中所扮演的角色一直以來缺乏關注，以此作為出發(fā)點來展開研究。
　　利用基因沉默技術在高表達PAX5的多發(fā)性骨髓瘤細胞系IM9中穩(wěn)定敲低PAX5的表達水平，構建了IM9/Contro1和IM9/PAX5-KD細胞系，在體外對這兩個細胞系的化療藥物敏感性進行了研究。發(fā)現(xiàn)IM9/PAX5-KD細胞對于Bortezomib，Vinblastine和Doxorubicin誘導凋亡的敏感性明顯增強了，裸鼠荷瘤模型的結果

4、也顯示出PAX5能夠增強IM9細胞的體內(nèi)成瘤，減弱腫瘤對Bortezomib的敏感性。進一步對PAX5誘導IM9細胞抗藥性的機制進行研究，發(fā)現(xiàn)PAX5高表達能夠增強TNF-o和LPS誘導的NF-κB激活，并且這種調(diào)節(jié)作用是通過PAX5與蛋白激酶RIP2相互作用介導的。體外Pull down實驗和細胞內(nèi)CoIP檢測的結果都顯示出這兩個蛋白的相互作用結構域分別是PAX5中間結構域和RIP2激酶結構域，并且PAX5的結合能夠促進RIP2激酶結

5、構域Ser176位點的磷酸化激活。RIP2是一個介導NOD蛋白向NF-κB傳遞激活信號的關鍵激酶，在實驗中還觀察到RIP2通過其Ser176位點的磷酸化促進了RIP2 K209位點的泛素鏈形成，進而影響了TNF-α誘導的NF-κB活化。因此，PAX5通過結合RIP2并促進其Ser176位點的磷酸化激活參與到TNF-α等刺激物誘導的NF-κB活化信號傳遞。在藥物誘導NF-κB激活的檢測中，發(fā)現(xiàn)Bortezomib，Vimblastine和

6、Doxorubicin能夠通過磷酸化RIP2 Ser176位點來增強NF-κB活性，但是在PAX5表達沉默后這三種藥物對NF-κB通路的激活能力被大大削弱了，提示我們這一過程需要PAX5的參與。將NF-κB通路特異性抑制后，Bortezomib和Vinblastine誘導的IM9/Control與IM9/PAX5-KD細胞凋亡差異消失，因此PAX5介導的NF-κB通路激活在IM9細胞對于Bortezomib和Vinblastine的抗藥

7、性中起著決定性作用。
　　PAX5雖然已經(jīng)被證實在一部分多發(fā)性骨髓瘤惡性漿細胞中高表達，但是PAX5在該腫瘤的發(fā)病和治療中產(chǎn)生的影響以及隱藏在其中的具體機制目前仍不明確。在本研究中，我們第一次發(fā)現(xiàn)PAX5的高表達誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞對一些臨床化療藥物產(chǎn)生抗藥性，并且從PAX5調(diào)節(jié)NF-κB信號通路激活這一方面很好的解釋了這種現(xiàn)象，該結果無論對于多發(fā)性骨髓瘤的病理研究還是臨床診斷和治療都有著重大的指導意義。同時，還對PAX5調(diào)節(jié)NF

8、-κB通路的具體方式和途徑進行了深入研究，發(fā)現(xiàn)了PAX5和RIP2的蛋白相互結合并且闡述了這種結合作用對RIP2和下游NF-κB通路帶來的影響，該發(fā)現(xiàn)進一步增加人們對PAX5的了解，特別是PAX5在調(diào)節(jié)B細胞發(fā)育以及B淋巴細胞腫瘤發(fā)生方面的功能影響。最后，在RIP2 Ser176位點磷酸化對RIP2泛素化的調(diào)節(jié)方面的研究成果豐富了人們對于RIP2翻譯后修飾和這些修飾之間的調(diào)節(jié)關系的認識，其中RIP2參與TNF-α誘導的NF-κB通路激活