FoxM1-C-Met正反饋環(huán)路促進(jìn)舌鱗癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲遷移的機(jī)制研究.pdf

1、口腔腫瘤是人類最常見的腫瘤之一，舌鱗癌是最常見的口腔癌病理類型。舌鱗癌早期容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而侵襲遷移是造成舌鱗癌不良預(yù)后的主要原因之一。越來越多的研究證明上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在腫瘤侵襲遷移過程中發(fā)揮重要作用。FoxM1是一個(gè)與細(xì)胞增殖相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，它的很多功能主要是通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)其下游的靶基因決定的。FoxM1在很多腫瘤組織中高表達(dá)，且其高表達(dá)常常提示腫瘤患者預(yù)后不佳。既往研究表明，F(xiàn)oxM1在腫瘤細(xì)胞EMT和侵襲遷移過程中具有

2、重要意義。但FoxM1在舌鱗癌細(xì)胞EMT和侵襲遷移過程中的作用機(jī)制尚不十分明確。
　　本研究發(fā)現(xiàn)在舌鱗癌細(xì)胞中存在FoxM1與c-Met的相互調(diào)節(jié)機(jī)制，形成一個(gè)正反饋環(huán)路促進(jìn)舌鱗癌細(xì)胞EMT和侵襲遷移，并可能是AKT信號(hào)通路在舌鱗癌細(xì)胞中持續(xù)激活的一個(gè)重要因素。本研究可分為三個(gè)部分:
　　第一部分:FoxM1與c-Met在舌鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義。我們用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)了FoxM1、c-Met和pAKT在58對(duì)舌

3、鱗癌組織及其癌旁組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)FoxM1、c-Met和pAKT在舌鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織。Spearman相關(guān)系數(shù)法分析結(jié)果顯示，F(xiàn)oxM1、c-Met和pAKT三個(gè)分子中任意兩分子在舌鱗癌組織中的表達(dá)正相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。Fisher精確檢驗(yàn)用于分析FoxM1、c-Met和pAKT與舌鱗癌患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系，結(jié)果顯示三個(gè)分子的表達(dá)均與舌鱗癌T分期、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　第二

4、部分:FoxM1通過c-Met信號(hào)通路促進(jìn)舌鱗癌上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲遷移的機(jī)制研究。我們?cè)谏圜[癌細(xì)胞SCC9和SCC25中干涉FoxM1的表達(dá)后，western blot結(jié)果顯示，pc-Met、c-Met、pAKT和Vimentin的蛋白表達(dá)水平有不同程度的降低，而E-cadherin的表達(dá)有所升高。Real time PCR結(jié)果顯示，c-Met mRNA的表達(dá)水平隨FoxM1 mRNA的下降而降低。Transwell細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果顯示，在舌鱗癌細(xì)胞SCC9和SCC25中干涉FoxM1的表達(dá)后，細(xì)胞的侵襲遷移能力有了一定程度的降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在舌鱗癌細(xì)胞SCC9和SCC25中過表達(dá)FoxM1后，western blot結(jié)果顯示，pc-Met、c-Met、pAKT和Vimentin的蛋白表達(dá)水平有不同程度的升高，E-cadherin的表達(dá)有所降低。而抑制劑LY294002具有一定的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。Real time PCR結(jié)果顯示，c-Met mRNA的表達(dá)水平

6、隨FoxM1 mRNA的升高而升高。LY294002則具有一定的抑制作用。Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在舌鱗癌細(xì)胞SCC9和SCC25中過表達(dá)FoxM1后，細(xì)胞的侵襲遷移能力顯著升高，而LY294002具有一定的抑制FoxM1促舌鱗癌細(xì)胞侵襲遷移的作用。利用ChIP結(jié)合PCR的方法，我們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子FoxM1在舌鱗癌細(xì)胞中能夠與c-Met的DNA啟動(dòng)子序列結(jié)合。熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)oxM1在舌鱗癌細(xì)胞中能顯

7、著增強(qiáng)c-Met的DNA啟動(dòng)子活性。
　　第三部分:c-Met信號(hào)通路通過調(diào)控FoxM1促進(jìn)舌鱗癌上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲遷移的機(jī)制研究。我們?cè)谏圜[癌細(xì)胞SCC9和SCC25中干涉c-Met的表達(dá)后，western blot結(jié)果顯示，F(xiàn)oxM1、pAKT和Vimentin的蛋白表達(dá)水平有不同程度的降低，而E-cadherin的表達(dá)有所升高。Real time PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)oxM1 mRNA的表達(dá)水平隨c-Met mRNA的下降而

8、降低。Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在舌鱗癌細(xì)胞SCC9和SCC25中干涉c-Met的表達(dá)后，細(xì)胞的侵襲遷移能力有了一定程度的降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在舌鱗癌細(xì)胞SCC9和SCC25中過表達(dá)c-Met后，western blot結(jié)果顯示，F(xiàn)oxM1、pAKT和Vimentin的蛋白表達(dá)水平有不同程度的升高，E-cadherin的表達(dá)有所降低，而抑制劑LY294002具有一定的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。Real time PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)ox

9、M1 mRNA的表達(dá)水平隨c-Met mRNA的升高而升高，LY294002則具有一定的抑制作用。Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在舌鱗癌細(xì)胞SCC9和SCC25中過表達(dá)c-Met后，細(xì)胞的侵襲遷移能力顯著升高，而LY294002具有一定的抑制c-Met促舌鱗癌細(xì)胞侵襲遷移的作用。
　　綜上所述，轉(zhuǎn)錄因子FoxM1在舌鱗癌細(xì)胞中能夠與c-Met的DNA啟動(dòng)子結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)節(jié)c-Met。我們還發(fā)現(xiàn)FoxM1、pAKT